[發明專利]雞傳染性支氣管炎病毒5b ELISA抗體檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201810265000.2
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN108680741B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 任濤;戴旭;吳耀棠;游人榮;林秋燕;廖明
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 楊曉松

1.一種雞傳染性支氣管炎ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒含有IBV非結構蛋白5b包被的ELISA反應板;

還包括：

酶標試劑；

封閉液；

制備所述ELISA反應板所用的包被液是pH為9.6的0.05M 碳酸鹽緩沖液；

所述的酶標試劑為辣根過氧化物酶標記的羊抗雞IgG抗體；

所述封閉液為含5%脫脂奶粉的PBS；

所述的IBV非結構蛋白5b的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述的IBV非結構蛋白5b的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

2.根據權利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述的IBV非結構蛋白5b是通過重組表達產生的。

3.根據權利要求2所述試劑盒，其特征在于，IBV非結構蛋白5b重組表達的方法如下：

S1.RT-PCR擴增IBV 5b基因；

S2.將步驟S1所得基因整合到質粒載體中，獲得重組質粒；

S3.將步驟S2所構建的重組質粒轉化到宿主菌中并誘導表達，獲得菌液；

S4.篩選攜帶IBV 5b基因的重組菌，在IPTG誘導下大量表達與HIS融合的5b重組蛋白；

S5.利用HIS標簽鎳柱親和層析柱純化，獲得提純后的IBV 5b重組蛋白。

4.根據權利要求3所述試劑盒，其特征在于，

步驟S1中，擴增IBV 5b基因的引物對如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示；

步驟S2中，所述的質粒載體為pET-32a；

步驟S3中，所述的宿主菌為大腸桿菌。

5.根據權利要求1所述試劑盒，其特征在于，還包括：

洗滌液；

稀釋液；

陽性對照樣品；

陰性對照樣品；

顯色液；

終止液。

6.根據權利要求5所述試劑盒，其特征在于，

所述的洗滌液為含0 .05％Tween-20的PBS；

所述的稀釋液為含5%脫脂奶粉的PBST；

所述的陽性對照樣品為抗IBV 5b雞血清；

所述的陰性對照樣品為陰性SPF雞血清；

所述的顯色液為TMB 單組分顯色液；

所述的終止液為2 M H₂SO₄。