[發(fā)明專(zhuān)利]通過(guò)有性繁殖菌種將家蠶培育成蠶蟲(chóng)草的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810264555.5
• 申請(qǐng)日: 2018-03-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108496694B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李祥麟;伏迪;蘭茹;汪永生;張馳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州雷旦生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A01G18/00
• 分類(lèi)號(hào): A01G18/00;A01K67/04
• 代理公司: 南京利豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王鋒;趙世發(fā)

1.一種通過(guò)有性繁殖菌種將家蠶培育成蠶蟲(chóng)草的方法，其特征在于包括：

（1）采用有性繁殖的方式培養(yǎng)蠶蟲(chóng)草母種，并制備形成菌液：取200g去皮土豆去皮、切塊，加4-6倍量0.1％-0.3％的NaCl溶液煮沸10-15min，之后過(guò)濾獲得濾出液；向所述濾出液中依次加入20g葡萄糖和20g瓊脂，攪拌加熱至瓊脂完全溶解后于110-125℃高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌25-35min形成PDA培養(yǎng)基，取出后擺成斜面?zhèn)溆茫?/p>

選擇子囊果孢子的子座長(zhǎng)度為4-5cm的蟲(chóng)草，使其在無(wú)菌條件下彈射出孢子，孢子落入PDA培養(yǎng)基中形成菌種；

于1000mL基液中加入200g土豆、10g牛肉膏、1gKH₂PO₄、20g葡萄糖、0.5g MgSO₄·7H₂O、5-10g蛋白胨形成液態(tài)培養(yǎng)基，取8-9塊1cm²的菌種置入所述液態(tài)培養(yǎng)基中，并以120-180r?min^-1、20-23℃條件下振蕩培養(yǎng)3-5d獲得菌絲；

將形成有菌絲的液態(tài)培養(yǎng)基于18-20℃培養(yǎng)24-48h，將生長(zhǎng)有菌絲的液態(tài)培養(yǎng)基稀釋形成懸浮液，之后將所述懸浮液與殼聚糖復(fù)合物按照1-1.5L：20-50g的比例混合形成噴淋液，以所述懸浮液浸泡桑葉0.5-2h后，向所述桑葉噴淋所述噴淋液；

其中，所述殼聚糖復(fù)合物包括40-70wt％殼聚糖、氨基酸、 20-30wt％維生素C、5-10wt％有機(jī)鈣、3-5wt％甲基磺酸；

（2）選擇4齡第6天到5齡第1-2天的蠶蟲(chóng)，并采用乙醇和丙三醇的混合液消毒吹干，將采用乙醇和丙三醇清洗后的蠶蟲(chóng)以紅外線(xiàn)滅菌的方式進(jìn)行殺菌處理，將消毒后的蠶蟲(chóng)轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)室中采用表面形成有所述噴淋液的桑葉喂養(yǎng)3-5天，并采用所述懸浮液保持培養(yǎng)室內(nèi)的濕度為65-70％，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為18-21℃；

（3）之后將感染的蠶蟲(chóng)取出置入發(fā)菌室并黑暗培養(yǎng)5-7天，黑暗培養(yǎng)的初始溫度為16-18℃，之后以每天增加1℃的速度增加至21-23℃；黑暗培養(yǎng)的環(huán)境濕度為65-70％；

（4）將黑暗處理后的蠶蟲(chóng)置于白天20-24℃、夜間10-14℃的光亮環(huán)境下轉(zhuǎn)色培養(yǎng)，直至蠶蟲(chóng)表面呈透明黃色，所述培養(yǎng)環(huán)境的濕度為65-70％；

（5）將轉(zhuǎn)色培養(yǎng)后的蠶蟲(chóng)于20-23℃、濕度為80-85％的環(huán)境中生長(zhǎng)30-35天，至蠶蟲(chóng)長(zhǎng)出子實(shí)體，子實(shí)體生長(zhǎng)至415cm后即可采摘。