[發明專利]細胞分離用微珠洗脫液及配制方法

在審

• 申請號: 201810260416.5
• 申請日: 2018-03-27
• 公開（公告）號: CN108410798A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 葉永清;黃能平
• 申請（專利權）人: 福建三一造血技術有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 濟南鼎信專利商標代理事務所(普通合伙) 37245
• 代理人: 曹玉琳

本發明公開了細胞分離用微珠洗脫液及配制方法，主要涉及細胞洗脫技術領域。每100ml中包括以下組分：IdeS酶800～1200U，半胱氨酸蛋白酶800～1200U，按質量體積濃度計牛血清蛋白BSA8％～12％和海藻糖8％～12％，以及甘氨酸4～6mmol，磷酸二氫鈉4～6mmol，氯化鉀4～6mmol，氯化鈉4～6mmol，使用1MHcl調整洗脫液PH值為6.5。本發明能夠充分利用Ides酶及甘氨酸對抗原或/和抗體結合的解離作用，克服各自的缺點，使微珠與細胞間的抗原抗體緊密結合解體，能夠完全將細胞從微珠上洗脫下來而最大程度保持細胞現有的特性，從而達到在純化細胞的前提下去除微珠的目的，效果好，反應快，能夠簡便經濟的獲得高純度無殘留的目的細胞。

技術領域

本發明涉及細胞洗脫技術領域，具體是細胞分離用微珠洗脫液及配制方法。

背景技術

細胞做為人體和動物的基本構成單位，是科研機構以及藥物研究機構的重要的基礎原材料。幾乎所有的生物學基礎研究以及藥物研發都要用到細胞，細胞的產品質量直接關系到整個科研實驗和藥物研究的質量。細胞存在于組織或者血液中，精確的研究某種特定細胞就需要將特定細胞從不同類型的組織和血液中分離純化出來，目前常用的細胞分離純化方法為利用抗原抗體結合的原理將細胞與標記抗體的微珠結合，然后利用不同的物理方法將微珠分離出來，達到細胞純化的目的。在此步驟之后，有的不對微珠與細胞進行分離，直接使用。有的使用復雜的寡聚氨基酸競爭性結合微珠表面抗體，從而分離細胞。

然而，現有的細胞分離方法，包括磁性法等，均存在微珠去除成本高、效果差的問題。主要表現在：(1)現有技術對細胞表面的微珠去除效果不佳，造成部分微珠沒有去除，隨著細胞進入后續的實驗或人體，對實驗環節及結果造成不良影響，甚至對人體造成不可逆的傷害。(2)現有技術用于去除微珠的表面結合抗體成本較高，例如合成的寡居氨基酸價格非常昂貴，大大提高了本環節的成本。上述問題普遍存在且一直未被解決，使得微珠的分離成為細胞分離的問題環節，亟待相關技術的跟進。

發明內容

本發明的目的在于提供細胞分離用微珠洗脫液及配制方法，它能夠使微珠與細胞間的抗體解體，從而達到在純化細胞的前提下去除微珠的目的，效果好，反應快，能夠簡便經濟的獲得高純度無殘留的目的細胞。

本發明為實現上述目的，通過以下技術方案實現：

細胞分離用微珠洗脫液，每100ml中包括以下組分：IdeS酶800～1200U，半胱氨酸蛋白酶800～1200U，按質量體積濃度計牛血清蛋白BSA8％～12％和海藻糖8％～12％，以及甘氨酸4～6mmol，磷酸二氫鈉4～6mmol，氯化鉀4～6mmol，氯化鈉4～6mmol。

作為一種最優配比，每100ml的上述細胞分離用微珠洗脫液中包括以下組分：IdeS酶1000U，半胱氨酸蛋白酶1000U，按質量體積濃度計牛血清蛋白BSA10％和海藻糖10％，以及甘氨酸5mmol，磷酸二氫鈉5mmol，氯化鉀5mmol，氯化鈉5mmol。

且優選通過以下方法配得：

(1)稱取6g的磷酸二氫鈉，3.73g的氯化鉀2.92g的氯化鈉和3.75g甘氨酸，用1L的去離子水溶解，氫氧化鈉調節pH值為6.5，得洗脫緩沖液；

(2)稱取10g的海藻糖，用100mL的所述洗脫緩沖液溶解均勻，得第一溶液；

(3)稱取10g的BSA，用100mL所述第一溶液溶解均勻，得第二溶液；

(4)稱取1000U的Ides酶，1000U的半胱氨酸蛋白酶，用100mL所述第二溶液溶解均勻，得第三溶液；

(5)所述第三溶液使用1M Hcl調整PH值至6.5,使用0.22um無菌濾器過濾，即得，所得溶液在-20°保存。上述細胞分離用微珠洗脫液的使用方法為：

(1)利用連接有抗體的微珠純化分離細胞，使得微珠表面連接有目的細胞；