[發明專利]細胞分離用微珠洗脫液及配制方法在審
| 申請號： | 201810260416.5 | 申請日： | 2018-03-27 |
| 公開（公告）號： | CN108410798A | 公開（公告）日： | 2018-08-17 |
| 發明（設計）人： | 葉永清;黃能平 | 申請（專利權）人： | 福建三一造血技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 濟南鼎信專利商標代理事務所(普通合伙) 37245 | 代理人： | 曹玉琳 |
| 地址： | 350108 福建省*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 微珠 細胞 洗脫液 細胞分離 甘氨酸 洗脫 配制 氯化鈉 半胱氨酸蛋白酶 氯化鉀 磷酸二氫鈉 牛血清蛋白 簡便經濟 抗體結合 抗原抗體 高純度 海藻糖 濃度計 無殘留 解離 解體 對抗 | ||
1.細胞分離用微珠洗脫液，其特征在于：每100ml中包括以下組分：IdeS酶800～1200U，半胱氨酸蛋白酶800～1200U，按質量體積濃度計牛血清蛋白BSA8％～12％和海藻糖8％～12％，以及甘氨酸4～6mmol，磷酸二氫鈉4～6mmol，氯化鉀4～6mmol，氯化鈉4～6mmol。
2.根據權利要求1所述細胞分離用微珠洗脫液，其特征在于：每100ml中包括以下組分：IdeS酶1000U，半胱氨酸蛋白酶1000U，按質量體積濃度計牛血清蛋白BSA10％和海藻糖10％，以及甘氨酸5mmol，磷酸二氫鈉5mmol，氯化鉀5mmol，氯化鈉5mmol。
3.根據權利要求1所述細胞分離用微珠洗脫液，其特征在于：是通過以下方法配得的：
(1)稱取6g的磷酸二氫鈉，3.73g的氯化鉀2.92g的氯化鈉和3.75g甘氨酸，用1L的去離子水溶解，氫氧化鈉調節pH值為6.5，得洗脫緩沖液；
(2)稱取10g的海藻糖，用100mL的所述洗脫緩沖液溶解均勻，得第一溶液；
(3)稱取10g的BSA，用100mL所述第一溶液溶解均勻，得第二溶液；
(4)稱取1000U的Ides酶，1000U的半胱氨酸蛋白酶，用100mL所述第二溶液溶解均勻，得第三溶液；
(5)所述第三溶液使用1M Hcl調整PH值至6.5,使用0.22um無菌濾器過濾，即得，所得溶液在-20°保存。
4.根據權利要求1所述細胞分離用微珠洗脫液，其特征在于：其為PH值是5.5～6.5的無色透明溶液。
5.根據權利要求1所述細胞分離用微珠洗脫液，其特征在于：其使用方法為：
(1)利用連接有抗體的微珠純化分離細胞，使得微珠表面連接有目的細胞；
(2)加入洗脫緩沖液，并加入相應體積的細胞洗脫液，混勻微珠；
(3)孵育20min；
(4)離心，去上清，沉淀即目的細胞，用于后續實驗。
6.細胞分離用微珠洗脫液的配制方法，其特征在于：包括以下步驟：
(1)稱取6g的磷酸二氫鈉，3.73g的氯化鉀2.92g的氯化鈉和3.75g甘氨酸，用1L的去離子水溶解，氫氧化鈉調節pH值為6.5，得洗脫緩沖液；
(2)稱取10g的海藻糖，用100mL的所述洗脫緩沖液溶解均勻，得第一溶液；
(3)稱取10g的BSA，用100mL所述第一溶液溶解均勻，得第二溶液；
(4)稱取1000U的Ides酶，1000U的半胱氨酸蛋白酶，用100mL所述第二溶液溶解均勻，得第三溶液；
(5)所述第三溶液使用1M鹽酸溶液調整PH值至6.5,使用0.22um無菌濾器過濾，即得，所得溶液在-20°保存。
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