[發(fā)明專利]混合型熱啟動(dòng)DNA聚合酶組合物、PCR擴(kuò)增試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810259092.3
• 申請(qǐng)日: 2018-03-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108546749B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周嬌嬌;李泓彥;莫顏瑛;張敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市艾偉迪生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 劉曉玲

1.一種混合型熱啟動(dòng)DNA聚合酶組合物，其特征在于，由Taq DNA聚合酶、抗Taq抗體和突變型KOD DNA聚合酶組成，其中，所述抗Taq抗體能夠與所述Taq DNA聚合酶特異性結(jié)合，所述突變型KOD DNA聚合酶由野生型KOD DNA聚合酶的第147位的組氨酸突變?yōu)橘嚢彼岬玫剑凰鯰aq DNA聚合酶與所述抗Taq抗體的濃度比為3:2；所述突變型KOD DNA聚合酶是由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；所述TaqDNA聚合酶與所述突變型KOD DNA聚合酶的酶活比為1U：(80U～160U)。

2.一種PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于，包括如權(quán)利要求1所述的混合型熱啟動(dòng)DNA聚合酶組合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于，還包括GC擴(kuò)增緩沖液，所述GC擴(kuò)增緩沖液中含有40mmol/L～60mmol/L的Tris-HCl、50mmol/L～150mmol/L的KCl、2mmol/L～8mmol/L的MgCl₂、20mmol/L～30mmol/L的(NH₄)₂SO₄、體積分?jǐn)?shù)為1％～3％的二甲基亞砜、體積分?jǐn)?shù)為0.001％～0.01％的Tween20、體積分?jǐn)?shù)為0.001％～0.01％的Triton-x-100和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5mg/mL～5mg/mL的BSA。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于，還包括PCR緩沖液和PCR增強(qiáng)劑，所述PCR緩沖液中含有10mmol/L～30mmol/L的Tris-HCl、0.5mmol/L～5mmol/L的MgCl₂、50mmol/L～80mmol/L的(NH₄)₂SO₄以及40mmol/L～60mmol/L的KCl，所述PCR增強(qiáng)劑為甜菜堿。

5.如權(quán)利要求2～4任一項(xiàng)所述的PCR擴(kuò)增試劑盒在擴(kuò)增DNA中的應(yīng)用，其特征在于，包括如下步驟：

將DNA擴(kuò)增模板、引物與PCR擴(kuò)增試劑盒混合得到擴(kuò)增體系；以及

將所述擴(kuò)增體系置于PCR儀中進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述DNA擴(kuò)增模板中GC含量為65％以上。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述擴(kuò)增體系中的所述DNA擴(kuò)增模板的含量為1pg以下。