[發(fā)明專利]一種抗枯萎病香蕉種質(zhì)的篩選方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810258980.3
• 申請(qǐng)日: 2018-03-27
• 公開（公告）號(hào): CN108476981A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金志強(qiáng);徐碧玉;張建斌;劉菊華;賈彩紅;王卓;苗紅霞;王甲水;王安邦;王靜毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01H1/04;A01H1/06
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 劉洋

本發(fā)明屬于香蕉愈傷組織輻射誘變育種領(lǐng)域，具體涉及一種抗枯萎病香蕉種質(zhì)的篩選方法。選取香蕉未成熟雄花愈傷組織為輻射突變材料，采用含有不同濃度鐮刀菌FOR4粗毒素培養(yǎng)基進(jìn)行香蕉未成熟雄花愈傷組織粗毒素篩選、分化芽粗毒素篩選、香蕉生根苗粗毒素篩選等，采用三次毒素脅迫篩選技術(shù)，增強(qiáng)了篩選壓力，提高了抗枯萎病突變種質(zhì)的篩選效率，縮短了培育香蕉抗枯萎病種質(zhì)篩選時(shí)間，提高抗病育種的效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于香蕉愈傷組織輻射誘變育種領(lǐng)域，具體涉及一種抗枯萎病香蕉種質(zhì)的篩選方法。

背景技術(shù)

香蕉是典型的熱帶亞熱帶果樹,廣泛分布于熱帶和南亞熱帶地區(qū)。我國是世界香蕉主產(chǎn)國之一，種植區(qū)域分布于廣東、海南、廣西、福建、云南及臺(tái)灣等省區(qū)，栽培面積和產(chǎn)量居全國水果的第四位。然而，香蕉產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展的同時(shí)，正遭遇有史以來枯萎病最嚴(yán)重的威脅和挑戰(zhàn)。

香蕉枯萎病，又稱巴拿馬病、黃葉病，是由尖鐮孢古巴專化型[Fusariumoxysporumf.sp.cubense(E.F.Smith)Snyder et Hasen，F(xiàn)oc]侵染引起的土傳維管束系統(tǒng)性的病害，侵染來源主要是帶菌的吸芽、病株殘?bào)w及帶菌土壤，一旦發(fā)病就會(huì)全株死亡，病菌蔓延快，很難根治。本世紀(jì)以來，廣東、海南、福建等地的香蕉栽培面積卻因巴拿馬枯萎病的泛濫大幅度減小。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，廣東、海南等地的主要香蕉產(chǎn)區(qū)香蕉枯萎病的影響面積達(dá)18萬公頃。與2010年相比，2013年海南的香蕉栽培面積幾乎減少50％，云南和廣西香蕉也開始大面積突發(fā)黃葉病。與香蕉產(chǎn)業(yè)遭受嚴(yán)重枯萎病危害相對(duì)應(yīng)的，是對(duì)香蕉枯萎病發(fā)病機(jī)制的研究有限，世界范圍內(nèi)還無抗枯萎病的新品種和有效防治措施。因此，培育抗香蕉枯萎病的新品種是遏制枯萎病蔓延，促進(jìn)香蕉產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的根本途徑。由于目前栽培的香蕉大部分是三倍體，單性結(jié)實(shí),具有高度的不育性，無法通過常規(guī)雜交選育抗枯萎病新品種，因此利用60Co-γ射線輻射誘變香蕉，培育香蕉突變體，從突變體中篩選具有抗枯萎病突變的新種質(zhì)，再培育獲得新品種是香蕉抗枯萎病育種的重要途徑之一。

目前國內(nèi)外對(duì)香蕉輻射誘變進(jìn)行抗枯萎病育種研究報(bào)道文獻(xiàn)較少，在輻射誘變材料的選擇上主要采用香蕉吸芽、香蕉組培芽或者香蕉幼苗，其方法主要缺點(diǎn)在于需要處理的突變材料多，篩選周期長、效率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種抗枯萎病香蕉種質(zhì)的篩選方法，選取香蕉未成熟雄花愈傷組織為輻射突變材料，采用愈傷組織鐮刀菌粗毒素篩選、分化芽粗毒素篩選、香蕉生根苗粗毒素篩選的三次鐮刀菌粗毒素篩選技術(shù)，提高了抗枯萎病突變種質(zhì)的篩選效率，縮短了培育香蕉抗枯萎病品種的周期。

本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供一種抗枯萎病香蕉種質(zhì)的篩選方法，包括以下步驟：

(1)粗毒素制備

將Foc4菌種接種至培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分離得到香蕉枯萎病菌粗毒素(下文簡(jiǎn)稱“粗毒素”)；

(2)香蕉未成熟雄花愈傷組織的輻射處理

對(duì)香蕉未成熟雄花愈傷組織進(jìn)行輻射處理，然后置于人工氣候箱進(jìn)行黑暗培養(yǎng)，使輻射后的愈傷組織恢復(fù)生長；

(3)香蕉未成熟雄花愈傷組織粗毒素篩選

將恢復(fù)生長的輻射后的愈傷組織轉(zhuǎn)至光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12-18天后，轉(zhuǎn)移到含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-32天；

選擇成活的愈傷組織轉(zhuǎn)移至愈傷組織繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)28-32天，定期更換培養(yǎng)基；

然后將愈傷組織接種于分化固體培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)愈傷組織分化出芽；

(4)分化芽粗毒素篩選

分化培養(yǎng)的幼芽長至約0.5cm時(shí)，將幼芽轉(zhuǎn)移至含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)；

(5)香蕉生根苗粗毒素篩選