[發明專利]一種抗枯萎病香蕉種質的篩選方法

在審

• 申請號: 201810258980.3
• 申請日: 2018-03-27
• 公開（公告）號: CN108476981A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 金志強;徐碧玉;張建斌;劉菊華;賈彩紅;王卓;苗紅霞;王甲水;王安邦;王靜毅
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/04;A01H1/06
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 劉洋

1.一種抗枯萎病香蕉種質的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)粗毒素制備

將Foc4菌種接種至培養基中培養，分離得到香蕉枯萎病菌粗毒素；

(2)香蕉未成熟雄花愈傷組織的輻射處理

對香蕉未成熟雄花愈傷組織進行輻射處理，然后置于人工氣候箱進行黑暗培養，使輻射后的愈傷組織恢復生長；

(3)香蕉未成熟雄花愈傷組織粗毒素篩選

將恢復生長的輻射后的愈傷組織轉至光照培養箱中培養12-18天后，轉移到含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的生長培養基中培養28-32天；

選擇成活的愈傷組織轉移至愈傷組織繼代培養基中進行繼代培養28-32天，定期更換培養基；

然后將愈傷組織接種于分化固體培養基上，誘導愈傷組織分化出芽；

(4)分化芽粗毒素篩選

分化培養的幼芽長至約0.5cm時，將幼芽轉移至含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的分化培養基上培養；

(5)香蕉生根苗粗毒素篩選

選擇步驟(4)后成活的分化幼芽轉移至含有100μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的生根培養基中培養35-45天，然后選擇生長健壯、根系發育良好的抗病突變苗轉移至營養土種植培養，幼苗長至5片新葉時移栽至種質圃保存。

2.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，步驟(1)中的制備粗毒素的培養基為Czaper液體培養基，步驟(1)的具體步驟為：將Foc4菌種接種于Czaper液體培養基中，27℃、120r/min，振蕩培養10-20天，除菌處理，得到香蕉枯萎病菌粗毒素。

3.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，步驟(3)和步驟(4)中的培養條件為：溫度25℃，光照強度1000lx，光周期為光照10小時/黑暗14小時。

4.根據權利要求1或3所述的篩選方法，其特征在于，步驟(3)中含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的生長培養基為：含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的MS+1.5mg/L生物素+100mg/L谷氨酰胺+0.2mg/L TDZ+0.2mg/L Zeatin+40g/L蔗糖+6.0g/L瓊脂固體培養基，且pH＝5.5。

5.根據權利要求1或3所述的篩選方法，其特征在于，步驟(3)中愈傷組織繼代培養基為MS+1.0mg/L生物素+100mg/L谷氨酰胺+0.2mg/L TDZ+0.2mg/L Zeatin+40g/L蔗糖+5.5g/L瓊脂的固體培養基，且pH＝5.3；步驟(3)中分化固體培養基為MMS+3.5mg/L BA+30g/L蔗糖+5.5g/L瓊脂的培養基，且pH＝5.8。

6.根據權利要求1或3所述的篩選方法，其特征在于，步驟(2)中輻射處理條件為：香蕉雄花愈傷組織以鈷60為輻照源，吸收劑量率為1.5Gy/min，最終吸收劑量為60Gy。

7.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，步驟(4)中含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的分化培養基為含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的MS+3.5mg/L BA+30g/L蔗糖+5.5g/L瓊脂的培養基，且pH＝5.8。

8.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，步驟(5)的培養條件為：溫度25℃，光照強度1500lx，光周期為光照12小時/黑暗12小時。

9.根據權利要求1或8所述的篩選方法，其特征在于，步驟(5)中含有100μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的生根培養基為含有100μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的MS+2mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.5g/L瓊脂的培養基，且pH＝5.8。

10.一種用于篩選抗枯萎病香蕉種質的培養基組，其特征在于，其包括：含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的生長培養基，含有30μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的分化培養基，以及含有100μg/ml香蕉枯萎病菌粗毒素的生根培養基。