[發(fā)明專利]一種乳鐵蛋白的液相色譜質(zhì)譜檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810254892.6
• 申請(qǐng)日: 2018-03-27
• 公開（公告）號(hào): CN108398503A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白沙沙;崔亞娟;趙玥;石明楊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市營(yíng)養(yǎng)源研究所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種乳鐵蛋白的液相色譜質(zhì)譜測(cè)定方法，其特征在于，包括：將待測(cè)樣品和乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品分別進(jìn)行胰蛋白酶酶解處理，制成含特異肽段的待測(cè)樣品供試液、含特異肽段的乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液處理試液；以特異肽段標(biāo)準(zhǔn)品配制特異肽段標(biāo)準(zhǔn)工作液；進(jìn)行高效液相色譜質(zhì)譜檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述特異肽段的氨基酸序列為VDSALYLGSR。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述含特異肽段的待測(cè)樣品供試液、含特異肽段的乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液處理試液的制備方法包括：將待測(cè)樣品、乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品分別依次用碳酸氫銨、二硫蘇糖醇、碘代乙酰胺處理，然后再在氯化鈣存在的條件下用胰蛋白酶酶解處理。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述含特異肽段的待測(cè)樣品供試液的制備方法包括：將待測(cè)樣品制成樣品溶液，加入碳酸氫銨或其溶液，混勻，加入二硫蘇糖醇或其溶液，于40-60℃恒溫反應(yīng)30-60min，冷卻；加入碘代乙酰胺或其溶液，暗處?kù)o止30-40min，加入氯化鈣或其溶液和胰蛋白酶或其溶液，酶解完全，加入甲酸，室溫靜止30-60min，最后加水定容，混勻后過0.22μm濾膜，即可；

優(yōu)選地，所述含特異肽段的待測(cè)樣品供試液的制備方法包括：將待測(cè)樣品制成總蛋白濃度或固形物濃度為2-10g/100mL的樣品溶液，吸取100-300μL樣品溶液，加入150-200μL濃度為500mmol/L的碳酸氫銨溶液，混勻，加入10-20μL濃度為500mmol/L的二硫蘇糖醇溶液，50℃恒溫反應(yīng)30-60min，取出冷卻，加入40-50μL濃度為500mmol/L的碘代乙酰胺溶液，暗處?kù)o止30-40min，加入10μL濃度為100mmol/L的氯化鈣溶液和30-60μL濃度為100μg/mL胰蛋白酶溶液，37℃恒溫酶解4-6小時(shí)，取出后加入10-20μL甲酸，室溫靜止30-60min，最后加水，使酶解液總體積為1.0mL，混勻后過0.22μm濾膜，即可。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述含特異肽段的乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液處理試液的制備方法包括：取適量乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，配制成一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液；吸取100-300μL該標(biāo)準(zhǔn)工作液，加入150-200μL濃度為500mmol/L的碳酸氫銨溶液，混勻，加入10-20μL濃度為500mmol/L的二硫蘇糖醇溶液，50℃恒溫反應(yīng)30-60min，取出冷卻，加入40-50μL濃度為500mmol/L的碘代乙酰胺溶液，暗處?kù)o止30-40min，加入10μL濃度為100mmol/L的氯化鈣溶液和30-60μL濃度為100μg/mL胰蛋白酶溶液，37℃恒溫酶解4-6小時(shí)，取出后加入10-20μL甲酸，室溫靜止30-60min，最后加水，使酶解液總體積為1.0mL，混勻后過0.22μm濾膜，即可。