[發(fā)明專利]一種大白蘭花生長點(diǎn)萃取物安全性檢測方法

在審

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• 申請日: 2018-03-26
• 公開（公告）號(hào): CN108330156A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蕭宏穎
• 申請（專利權(quán)）人: 上海數(shù)儒生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/02
• 分類號(hào): C12Q1/02;G01N27/447
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發(fā)明公開了一種大白蘭花生長點(diǎn)萃取物安全性檢測方法，涉及技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明包括SS01、檢測細(xì)胞存活度：SS02、評(píng)估蘭花生長點(diǎn)萃取物之保護(hù)因紫外線及氧化傷害而造成的DNA損傷：SS03、評(píng)估蘭花生長點(diǎn)萃取物修護(hù)因紫外線造成皮膚細(xì)胞損傷。本發(fā)明通過對蘭花萃取物進(jìn)行檢測試驗(yàn)后，使用蘭花萃取液蘭花生長點(diǎn)萃取物作為化妝品的添加劑開發(fā)新的化妝品系列，提高了蘭花產(chǎn)業(yè)的附加價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于萃取物安全性檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種大白蘭花生長點(diǎn)萃取物安全性檢測方法。

背景技術(shù)

化妝品是指以涂抹、噴灑或者其他類似方法，散布于人體表面的任何部位，如皮膚、毛發(fā)、指趾甲、唇齒等，以達(dá)到清潔、保養(yǎng)、美容、修飾和改變外觀，或者修正人體氣味，保持良好狀態(tài)為目的的化學(xué)工業(yè)品或精細(xì)化工產(chǎn)品。化妝品種主要是由一些添加劑組成；而現(xiàn)有的一些添加劑對皮膚都有一定的損害作用；2010年后，零負(fù)擔(dān)產(chǎn)品開始誕生，一批零負(fù)擔(dān)產(chǎn)品，將主導(dǎo)減少?zèng)]必要的化學(xué)成分，增加純凈護(hù)膚成分為主題，給用過頻繁化妝品的女性朋友帶了全新的變革，“零負(fù)擔(dān)”產(chǎn)品的主要特點(diǎn)在于，產(chǎn)品激烈減少了很多無用成分，護(hù)膚成分，例如玻尿酸、膠原蛋白等均為活性使用，直接肌膚吸收，產(chǎn)品性能極其溫和，哪怕再脆弱的肌膚只要使用妥當(dāng)，一般也沒有問題，因此，這就可以最大限度的化妝不破壞皮膚。

目前市場上未有開發(fā)蘭花生長點(diǎn)萃取物之化妝品；因此針對以蘭花萃取液作為化妝品的添加劑制造蘭花系列的化妝品之前需對蘭花對皮膚細(xì)胞的損傷進(jìn)行測定，本發(fā)明一種大白蘭花生長點(diǎn)萃取物安全性檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種大白蘭花生長點(diǎn)萃取物安全性檢測方法，通過細(xì)胞存活度試驗(yàn)；細(xì)胞周期試驗(yàn)；保護(hù)因紫外線及氧化傷害而造成的DNA損傷試驗(yàn)；修護(hù)因紫外線及氧化傷害而造成的皮膚細(xì)胞損傷試驗(yàn)對蘭花萃取物的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，解決了現(xiàn)有蘭花系列化妝品空缺的問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明為一種大白蘭花生長點(diǎn)萃取物安全性檢測方法，包括如下過程：

SS01、檢測細(xì)胞存活度：

具體包括評(píng)估蘭花生長點(diǎn)萃取液對皮膚細(xì)胞是否具細(xì)胞毒性，評(píng)估蘭花生長點(diǎn)萃取液對皮膚細(xì)胞型態(tài)變化，評(píng)估皮膚細(xì)胞周期；

SS02、評(píng)估蘭花生長點(diǎn)萃取物之保護(hù)因紫外線及氧化傷害而造成的DNA損傷：

具體包括蘭花生長點(diǎn)萃取物保護(hù)環(huán)狀DNA效應(yīng)評(píng)估、蘭花生長點(diǎn)萃取物保護(hù)片段化DNA效應(yīng)評(píng)估；

SS03、評(píng)估蘭花生長點(diǎn)萃取物修護(hù)因紫外線造成皮膚細(xì)胞損傷：

具體包括評(píng)估萃取物修護(hù)皮膚細(xì)胞經(jīng)紫外線作用后細(xì)胞存活度、評(píng)估偵測DNA損傷之環(huán)丁嘧啶二聚體生成量。

進(jìn)一步地，所述SS01中檢測細(xì)胞存活度中評(píng)估蘭花生長點(diǎn)萃取液對皮膚細(xì)胞是否具細(xì)胞毒性的過程如下步驟：

S011、皮膚細(xì)胞培養(yǎng)：取人類皮膚角質(zhì)株化細(xì)胞培養(yǎng)在96孔培養(yǎng)板中，并96孔培養(yǎng)板放在37℃以及5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至少24小時(shí)；

S012、萃取液配置：取冷藏備用的蘭花生長點(diǎn)萃取物并配置成不同濃度梯度的萃取液；

S013、細(xì)胞毒性評(píng)估：向S011中的96孔培養(yǎng)板加入S012配置的不同濃度的萃取液，反應(yīng)后移除培養(yǎng)液，并用無菌PBS清洗一次后重新加入培養(yǎng)液以及10ul的MTT溶液反應(yīng)，在37℃以及5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)反應(yīng)4小時(shí)后移除培養(yǎng)液，加入100μL的DMSO溶解甲臢沉淀物，最后于波長570nm下測定吸光值。

進(jìn)一步地，所述SS01中檢測細(xì)胞存活度中評(píng)估蘭花生長點(diǎn)萃取液對皮膚細(xì)胞型態(tài)變化的過程如下步驟：