[發明專利]降解亞硝酸鈉的多粘類芽孢桿菌菌株及其篩選和應用

有效

• 申請號: 201810253383.1
• 申請日: 2018-03-26
• 公開（公告）號: CN108396003B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 周文文;黃秋盈;湯曦;蔣晶
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A23L5/20;C12R1/01
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 鄭海峰

本發明公開了一種降解亞硝酸鈉的多粘類芽孢桿菌菌株及其篩選和應用，該菌Paenibacillus polymyxa JM01保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號CGMCC 15240。本發明包括菌株的分離培養及16S rDNA分子鑒定；多粘類芽孢桿菌培養后，活性物質菌懸液的獲得；在體外，該菌株對亞硝酸鹽的降解效果；在體內，腌制豬肉中的亞硝酸鹽的降解應用。本發明篩選的多粘類芽孢桿菌能對亞硝酸鹽進行有效降解，可用于含亞硝酸鹽食品中減少亞硝酸鹽含量的添加物。

技術領域

本發明屬于新菌種篩選技術及微生物技術領域，特別涉及一株能降解亞硝酸 鈉的多粘類芽孢桿菌及其在肉制品中的應用。

背景技術

亞硝酸鈉是一種普遍應用的食品添加劑，在腌制肉制品中應用由來已久。它 在肉制品中的最大允許添加量是0.15g/kg，最大允許殘留量為30mg/kg。亞硝 酸鈉殘留因能形成亞硝胺而成為一種強烈致癌物質，它在食品中的添加和殘留受 到很大的關注。由于亞硝酸鈉的殘留，加工肉制品被世衛組織下屬機構國際癌癥 研究機構列為第一類致癌物質。

研究表明，亞硝酸鹽在腌制肉的貯存過程中會逐漸減少，有些細菌(比如乳 酸菌)具有降解亞硝酸鹽的作用。其作用機制有通過酶降解和酸降解途徑。關于 多粘類芽孢桿菌降解亞硝酸鈉未見相關報道。本發明主要是將多粘類芽孢桿菌的 不同活性成分作為降解劑，噴灑到腌制豬肉表面，測定其亞硝酸鹽降解效果。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種降解亞硝酸鈉的多粘類芽孢桿菌菌劑 及其制備方法和具體應用。

本發明公開了一種降解亞硝酸鈉的多粘類芽孢桿菌菌株，保藏名稱為多粘類 芽孢桿菌JM01(Paenibacillus polymyxa JM01)，保藏于中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號， 保藏號為CGMCC 15240，保藏日期為2018年1月18日。

降解亞硝酸鈉的菌株經16S rDNA鑒定，為Paenibacillus polymyxa。所述 菌株的單菌落為圓形、白色、邊緣清晰、不透明、表面略褶皺。菌株需氧性試驗 結果顯示可在培養基中間和表面生長，為兼性好氧菌。如圖1和2所示。

本發明以改良MRS培養基為篩選培養基，具體方法為：稱取金華火腿樣品 加入到裝有無菌生理鹽水的三角瓶中，振蕩均勻制成懸液，吸取適量懸液涂布于 含亞硝酸鈉的MRS固體培養基上，30-37℃下培養2-3d，待培養皿中長出菌落 后，挑取單個菌落在改良MRS固體培養基上進行反復分離劃線，并連續三代培 養獲得遺傳穩定性的菌株，即為所述降解亞硝酸鈉的多粘類芽孢桿菌屬菌株。

所述的降解亞硝酸鈉的多粘類芽孢桿菌菌株可以用于制備降解腌制豬肉中 亞硝酸鹽的菌劑。

活性成分分別是多粘類芽孢桿菌的發酵培養液、菌懸液和菌體干粉。

含有多粘類芽孢桿菌的菌劑的成分為，每毫升降解菌劑中含有多粘類芽孢桿 菌10⁷-10¹⁰個。

活性成分的制備過程如下：

1)多粘類芽孢桿菌菌種在LB固體培養基上生長，其培養基配方為胰蛋白 胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L、瓊脂20g/L，用0.1mol/L的NaOH 調節pH 7.4，在121℃下滅菌20min。

2)挑取1)中適量的多粘類芽孢桿菌加入到含有50mL LB液體培養基的 錐形瓶中(菌株的接種量為1-2％(V/V))，放置在37℃，靜置培養12-16h， 然后在超凈臺稀釋6-7倍，每個濃度取150μL菌液涂布到LB固體培養基中。

3)根據2)中測得的菌落數，將多粘類芽孢桿菌的濃度稀釋到1×10⁷-1×10¹⁰ CFU/mL，即得到多粘類芽孢桿菌發酵培養液。