[發(fā)明專利]一種生防菌劑及其在防治灰霉病中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810249695.5
• 申請日: 2018-03-26
• 公開（公告）號: CN108203703B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葉志堅;齊曄;周競夫;朱錫杭;朱增湖
• 申請（專利權(quán)）人: 南寧漢和生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C12N1/14;A01N63/32;A01N63/38;A01N63/27;A01P3/00;C12R1/645;C12R1/885;C12R1/38
• 代理公司: 東莞市神州眾達專利商標事務(wù)所(普通合伙) 44251
• 代理人: 周松強

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種生防菌劑，其包括絲孢酵母、康氏木霉以及施氏假單胞菌。本發(fā)明生防菌劑可有效抑制番茄灰霉病病原菌的生長，環(huán)保無污染，不會產(chǎn)生抗性，有利于作物的無公害生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生防菌劑及其在防治灰霉病中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

灰霉病是露地、保護地作物常見且比較難防治的一種真菌性病害，屬低溫高濕型病害，病原菌生長溫度為20～30℃，溫度20～25℃、濕度持續(xù)90%以上時為病害高發(fā)期。灰霉病由灰葡萄孢菌侵染所致，屬真菌病害，花、果、葉、莖均可發(fā)病。果實染病，青果受害重，殘留的柱頭或花瓣多先被侵染，后向果實擴展，致使果皮呈灰白色，并生有厚厚的灰色霉層，呈水腐狀，葉片發(fā)病從葉尖開始，沿葉脈間成“V”形向內(nèi)擴展，灰褐色，邊有深淺相間的紋狀線，病鍵交界分明。 該病害是一種典型的氣傳病害，可隨空氣、水流以及農(nóng)事作業(yè)傳播。在實際病害防治過程中，難以采取有效措施徹底切斷傳染源；在病原菌侵入的情況下，也難以徹底消滅病原菌，如藥劑噴施，難以解決空氣及露水中的病原菌；而單獨熏棚，不能重點解決病葉、病果等病殘體上或內(nèi)部的病原菌。灰霉病病苗色淺，葉片、葉柄發(fā)病呈灰白色，水漬狀，組織軟化至腐爛，高濕時表面生有灰霉。幼莖多在葉柄基部出現(xiàn)不規(guī)則水浸斑，很快變軟腐爛，縊縮或折倒，最后病苗腐爛枯萎病死。

防治方法可分為農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治和生物防治。農(nóng)藥防治包括對種子進行滅菌處理、合理種植密度、控制合適濕度以及通風(fēng)等；化學(xué)防治目前應(yīng)用比較廣泛，對灰霉病的主要防治措施是噴灑化學(xué)藥劑等手段，但是由于長期的使用化學(xué)藥使得灰霉病菌對多種殺菌劑產(chǎn)生了抗藥性。我國多地區(qū)的田間和保護地栽培設(shè)施中的多種蔬菜上的灰霉病菌都產(chǎn)生了較為嚴重的抗藥性，甚至有些地區(qū)的灰霉病對多菌靈等殺菌劑的抗性達到80％以上。尋求新的防治措施成為灰霉病防治的重中之重。生物防治措施作為一種新興的防治措施，與其他方法相比，具有安全、有效、持久的特點，特別是避免了化學(xué)防治帶來的一系列問題。生物防治方法是采用微生物對灰霉進行殺滅，目前已經(jīng)開始在農(nóng)業(yè)上推廣使用，比較常見的的是于發(fā)病前或初期使用3億CFU/克哈茨木霉菌300噴霧，兌水噴霧，每隔5-7天噴施一次，可在一定程度上防治灰霉病的發(fā)生。生物防治對病害防治效果好，對人畜無毒，不污染環(huán)境，無殘留；對病蟲害的殺傷特異性強，不傷害天敵，有益生物，能保持生態(tài)平衡；生產(chǎn)原料和有效成分為天然產(chǎn)物易降解，可回歸大自然，保證可持續(xù)發(fā)展。因此生物防治灰霉病方法逐漸成為研究的熱點，大量的拮抗微生物被篩選出來加以利用來對灰霉病進行防治。單一菌株往往存在防治效果低下、藥效慢等缺陷，目前已經(jīng)有多個生物農(nóng)藥公司開始研究復(fù)合微生物制劑。復(fù)合微生物制劑一般是指包括兩種以上的微生物的制劑，選擇復(fù)合微生物制劑中的菌株較為關(guān)鍵，也是難點；如果選擇不慎，菌株之間反而會起到相互拮抗的反作用。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)復(fù)合微生物制劑種類少，菌株配伍難等缺陷，本發(fā)明提供了一種生防菌劑及其在防治灰霉病中的應(yīng)用。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

一種生防菌劑，其包括絲孢酵母、康氏木霉以及施氏假單胞菌。

具體地，

所述生防菌劑按照如下工藝制備而得：

1）將絲孢酵母劃線接種在YPDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到單菌落；挑取單菌落接種到Y(jié)PD液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，30℃培養(yǎng)24h，得到絲孢酵母種子液，待用；

2）將康氏木霉劃線接種在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到單菌落；挑取單菌落接種到PDA液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，30℃、200rpm搖床培養(yǎng)36h，得到康氏木霉種子液，待用；

3）先將康氏木霉種子液按照10-15%的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)6小時，然后將絲孢酵母種子液按照5-7%的接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基，繼續(xù)以30℃培養(yǎng)18小時，得到康氏木霉-絲孢酵母混合發(fā)酵液；