[發明專利]一種生防菌劑及其在防治灰霉病中的應用

有效

• 申請號: 201810249695.5
• 申請日: 2018-03-26
• 公開（公告）號: CN108203703B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 葉志堅;齊曄;周競夫;朱錫杭;朱增湖
• 申請（專利權）人: 南寧漢和生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C12N1/14;A01N63/32;A01N63/38;A01N63/27;A01P3/00;C12R1/645;C12R1/885;C12R1/38
• 代理公司: 東莞市神州眾達專利商標事務所(普通合伙) 44251
• 代理人: 周松強

1.一種生防菌劑，其特征在于，所述生防菌劑按照如下工藝制備而得：

1）將絲孢酵母劃線接種在YPDA培養基上培養，得到單菌落；挑取單菌落接種到YPD液體培養基上培養，30℃培養24h，得到絲孢酵母種子液，待用；

2）將康氏木霉劃線接種在PDA培養基上培養，得到單菌落；挑取單菌落接種到PDA液體培養基上培養，30℃、200rpm搖床培養36h，得到康氏木霉種子液，待用；

3）先將康氏木霉種子液按照10-15%的接種量接入到發酵培養基中，30℃培養6小時，然后將絲孢酵母種子液按照5-7%的接種量接入到發酵培養基，繼續以30℃培養18小時，得到康氏木霉-絲孢酵母混合發酵液；

4）將施氏假單胞菌在LB平板上劃線培養，得到單菌落；挑取單菌落分別接入LB液體培養基上培養，28℃，200r/min的搖床培養24h，制成種子液；然后按照10%的接種量接入到擴大培養基中，28℃培養24h，得到施氏假單胞菌培養液；

5）將康氏木霉-絲孢酵母混合發酵液和施氏假單胞菌培養液按照2-3:1-2的體積比混合均勻，然后真空冷凍干燥制得菌粉，即得；

所述發酵培養基的配方為：玉米秸稈粉16g/L、豆粕10g/L、氯化銨5g/L、磷酸氫二鉀2g/L、磷酸二氫鉀1g/L、氯化鈉0.5g/L、硫酸鎂0.1g/L、硫酸亞鐵0.01g/L；

所述擴大培養基的配方為：玉米淀粉12g/L、酵母提取物10g/L、氯化鈉5g/L、尿素2g/L、磷酸二氫鉀0.1g/L、磷酸氫二鉀0.1g/L、硫酸亞鐵0.01g/L、硫酸錳0.01g/L；

所述施氏假單胞菌(Pseudomonas stutzeri)為ATCC17588；所述康氏木霉(Trichoderma koningii)為ATCC66766；所述絲孢酵母(Trichosproom sp.)為ATCC201110。

2.根據權利要求1所述的生防菌劑，其特征在于，所述YPD培養基的配方為：葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母提取浸粉10g，補充蒸餾水至1000mL。

3.根據權利要求1所述的生防菌劑，其特征在于，所述YPDA培養基的配方為：葡萄糖20g，蛋白胨20g，酵母提取浸粉10g，瓊脂20g ,補充蒸餾水至1000mL。