[發明專利]用于檢測丁酰膽堿酯酶的熒光探針及其應用

有效

• 申請號: 201810247083.2
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN110294720B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 潘雪華
• 申請（專利權）人: 香港理工大學深圳研究院
• 主分類號: C07D277/66
• 分類號: C07D277/66;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 深圳中一專利商標事務所 44237
• 代理人: 黃志云

1.一種熒光探針在制備檢測丁酰膽堿酯酶活性的試劑盒中的用途，其特征在于，所述熒光探針為非肽類熒光探針，且所述非肽類熒光探針的結構如下式1所示：

2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述非肽類熒光探針用于檢測丁酰膽堿酯酶時，所述非肽類熒光探針的苯甲酰基作為識別基團，與所述丁酰膽堿酯酶結合。

3.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述非肽類熒光探針用于檢測丁酰膽堿酯酶時，所述丁酰膽堿酯酶與所述非肽類熒光探針的摩爾用量比為1μM：(1-100)μM。

4.一種檢測丁酰膽堿酯酶活性的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1-3任一項所述非肽類熒光探針和丁酰膽堿酯酶的標準品。

5.如權利要求4所述的檢測丁酰膽堿酯酶活性的試劑盒，其特征在于，還包括濃度為50-100mM的Tris-HCl緩沖溶液。

6.一種如權利要求4所述的檢測丁酰膽堿酯酶活性的試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

提供丁酰膽堿酯酶標準品、丁酰膽堿酯酶待測樣品和非肽類熒光探針；

將所述丁酰膽堿酯酶標準品和所述非肽類熒光探針混合反應，得到熒光團反應產物；檢測激發光刺激下的反應產物的熒光強度變化值隨時間的變化值，獲取丁酰膽堿酯酶-熒光強度變化值標準曲線，得到丁酰膽堿酯酶-熒光強度變化值線性方程；

在與所述丁酰膽堿酯酶標準品相同的檢測條件下，將所述丁酰膽堿酯酶待測樣品和所述非肽類熒光探針混合反應，得到熒光團反應產物；檢測激發光刺激下的反應產物的熒光強度變化值，代入所述丁酰膽堿酯酶-熒光強度變化值線性方程中，計算獲得所述丁酰膽堿酯酶待測樣品的濃度。

7.如權利要求6所述的檢測丁酰膽堿酯酶活性的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述激發光的波長為325nm，在所述激發光刺激下的所述熒光團反應產物的熒光的發射波長為460nm。

8.如權利要求6所述的檢測丁酰膽堿酯酶活性的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述混合反應的條件為：溫度為25-37℃，pH值為6-8，時間為5-30min。

9.如權利要求6所述的檢測丁酰膽堿酯酶活性的試劑盒的使用方法，其特征在于，將所述丁酰膽堿酯酶標準品或所述丁酰膽堿酯酶待測樣品與所述非肽類熒光探針混合反應的步驟，在濃度為50-100mM的Tris-HCl緩沖液中進行。

10.一種如權利要求1-3任一項所述非肽類熒光探針在丁酰膽堿酯酶檢測領域的應用，其特征在于，所述應用包括所述熒光探針用于檢測丁酰膽堿酯酶活性，所述熒光探針用于丁酰膽堿酯酶抑制劑或促進劑的動力學表征領域的應用。