[發明專利]一種酶法制備酪胺的方法

有效

• 申請號: 201810246098.7
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108504700B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 何連順;米造吉;李斌水;劉玉兵;曹珊
• 申請（專利權）人: 精晶藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12N9/88;C12N11/02;C12N11/10
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 郝曉紅

1.一種酶法制備酪胺的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）酶的固定化：將L-酪氨酸-α-脫羧酶加入到PBS緩沖溶液中，配制成酶液，酶液濃度為60-90g/L，酶液在0±2℃下超聲破碎，超聲破碎條件為：20-22KHZ，15-20min，得到L-酪氨酸-α-脫羧酶液，后將L-酪氨酸-α-脫羧酶液加入到氯化鈣水溶液A中，在40-50℃反應，反應后分離得到粗酶液；

稱取海藻酸鈉與明膠，加入水，加熱溶解后降溫，得到海藻酸鈉和明膠的混合水溶液，再加入上述粗酶液并攪拌均勻，得到混合液；將混合液加入氯化鈣水溶液B中，攪拌，加畢靜置使之硬化，過濾，加入戊二醛交聯劑，浸泡，過濾，洗滌，得到固定化L-酪氨酸-α-脫羧酶；

2）配制底物溶液：向反應器中投入L-酪氨酸，加入水配成底物懸濁液，加入堿液和酸液，控制無機鹽質量濃度1-5%之間，即得底物溶液；所述堿液為碳酸氫鈉水溶液、氨水、碳酸鈉水溶液、氫氧化鈉水溶液中的一種；酸液為硫酸、鹽酸、硝酸、磷酸中的一種；無機鹽為硫酸銨、硫酸鈉、氯化銨、氯化鈉，硝酸鈉、硝酸銨、磷酸鈉、磷酸銨中的一種；

3）酶催化轉化：向底物溶液中一次性加入固定化L-酪氨酸-α-脫羧酶，控制溫度20-50℃條件下進行催化反應，至底物反應完全，最終得到酪胺轉化液。

2.根據權利要求1所述的一種酶法制備酪胺的方法，其特征在于：步驟1）中：氯化鈣水溶液A為質量濃度3.0%的氯化鈣水溶液，氯化鈣水溶液A所用毫升數為L-酪氨酸-α-脫羧酶所用克數的10-12倍。

3.根據權利要求1所述的一種酶法制備酪胺的方法，其特征在于：步驟1）中：氯化鈣水溶液B為質量濃度3.0%的氯化鈣水溶液，氯化鈣水溶液B所用體積為混合液體積的2倍。

4.根據權利要求1所述的一種酶法制備酪胺的方法，其特征在于：步驟1）中：稱取海藻酸鈉與明膠，加入水，60-70℃加熱溶解后，降溫，得到海藻酸鈉和明膠的混合水溶液；海藻酸鈉和明膠的混合水溶液中，海藻酸鈉的質量濃度為1.5-2.0%，明膠的質量濃度為1.0-1.5%，海藻酸鈉和明膠的混合水溶液體積為粗酶液體積的1.9-2.2倍。

5.根據權利要求1所述的一種酶法制備酪胺的方法，其特征在于：步驟1）中：粗酶液反應時間為1-9h。

6.根據權利要求1所述的一種酶法制備酪胺的方法，其特征在于：步驟1）中：戊二醛交聯劑的質量濃度為0.1-0.9%。

7.根據權利要求1所述的一種酶法制備酪胺的方法，其特征在于：步驟2）中：底物溶液中L-酪氨酸底物濃度為15-180g/L。

8.根據權利要求1所述的一種酶法制備酪胺的方法，其特征在于：步驟3）酶催化轉化中：固定化L-酪氨酸-α-脫羧酶用量是L-酪氨酸質量的3%-30%。