[發明專利]一種酶法制備酪胺的方法

有效

• 申請號: 201810246098.7
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108504700B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 何連順;米造吉;李斌水;劉玉兵;曹珊
• 申請（專利權）人: 精晶藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12N9/88;C12N11/02;C12N11/10
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 郝曉紅

本發明公開了一種酶法制備酪胺的方法，涉及生物酶工程技術領域。步驟如下：1)L?酪氨酸?α?脫羧酶加入到PBS緩沖溶液中破碎后加入到氯化鈣水溶液A中，40?50℃反應，分離得粗酶液；取海藻酸鈉和明膠的混合水溶液，加入粗酶液攪拌得混合液；混合液加入氯化鈣水溶液B中，攪拌，靜置，過濾，加入戊二醛交聯劑，浸泡，過濾，洗滌，得固定化L?酪氨酸?α?脫羧酶；2)L?酪氨酸和水配成底物懸濁液，加入堿液和酸液，控制無機鹽質量濃度1?5％之間，得底物溶液；3)向底物溶液中一次性加入固定化L?酪氨酸?α?脫羧酶，20?50℃下催化反應，至底物反應完全，得酪胺轉化液。本發明酶催化轉化率高，無副反應，產品純度高，生產成本低。

技術領域

本發明涉及生物酶工程和醫藥技術領域，尤其是一種酶法制備酪胺的方法。

背景技術

酪胺[2-(4-Hydroxyphenyl)ethylamine]，又名對羥基苯乙胺，是一種具有升高血壓和興奮子宮的藥物，可用于生化試劑、有機合成藥物中間體，可用于治療偏頭疼和診斷噬鉻細胞瘤的藥物，現在主要用于降血脂藥物苯扎貝特的中間體。

酪胺是一種可以從麥角堿或腐爛動植物組織中分離出來的一種化合物，目前國內外有報道采用化學合成法以苯乙腈、苯酚、茴香醛等原料為起始反應物進行合成。以上化學合成方法工藝路線較長，反應步驟多，總收率低，能耗較高，反應過程不易控制，對環境污染較大。也有中國專利(公開號CN101955435A)公開的工藝路線是采用化學催化劑，在有機溶劑體系中將底物酪氨酸進行催化轉化，催化溫度在140-170℃之間，過程需要進行脫水裝置進行脫水，過程采用氮氣保護，反應結束后還要進行水解反應才能獲得酪胺；此路線采用了溶媒體系，反應過程能耗較大，脫水條件苛刻，不利于低碳環保。中國專利(公開號CN105695525A)公開的工藝路線是以L-酪氨酸為底物，以屎腸球菌為催化劑，過程通入氮氣和氧氣，通過反應24-36h獲得酪胺溶液粗品，之后將酪胺溶液粗品加入苯中，低溫過濾，所得酪胺再在乙醇中沸騰脫色，過濾后進行結晶得到酪胺，此路線采用生物菌為催化劑，生產周期長，過程使用的苯溶劑毒性較大。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種酶法制備酪胺的方法，該方法酶催化轉化率高，無副反應，產品純度高，生產成本低。

為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：一種酶法制備酪胺的方法，包括以下步驟：

1)酶的固定化：將L-酪氨酸-α-脫羧酶加入到PBS緩沖溶液中，配制成酶液，將酶液破碎，得到L-酪氨酸-α-脫羧酶液；然后將L-酪氨酸-α-脫羧酶液加入到氯化鈣水溶液A中，在40-50℃反應，反應后分離得到粗酶液；

稱取海藻酸鈉與明膠，加入水，加熱溶解后降溫，得到海藻酸鈉和明膠的混合水溶液，再加入上述粗酶液并攪拌均勻，得到混合液；將混合液加入氯化鈣水溶液B中，攪拌，加畢靜置使之硬化，過濾，加入戊二醛交聯劑，浸泡，過濾，洗滌，得到固定化L-酪氨酸-α-脫羧酶；

2)配制底物溶液：向反應器中投入L-酪氨酸，加入水配成底物懸濁液，加入堿液和酸液，控制無機鹽質量濃度1-5％之間，即得底物溶液；

3)酶催化轉化：向底物溶液中一次性加入固定化L-酪氨酸-α-脫羧酶，控制溫度20-50℃條件下進行催化反應，至底物反應完全，最終得到酪胺轉化液。

優選的，步驟1)中：將L-酪氨酸-α-脫羧酶加入到PBS緩沖溶液中，配制成L-酪氨酸-α-脫羧酶濃度為60-90g/L的酶液，將酶液在0±2℃下超聲破碎，超聲破碎條件為：20-22KHZ，5-20min，得到L-酪氨酸-α-脫羧酶液。

優選的，步驟1)中：氯化鈣水溶液A為質量濃度3.0％的氯化鈣水溶液，氯化鈣水溶液A所用毫升數為L-酪氨酸-α-脫羧酶所用克數的10-12倍。

優選的，步驟1)中：氯化鈣水溶液B為質量濃度3.0％的氯化鈣水溶液，氯化鈣水溶液B所用體積為混合液體積的2倍。