[發明專利]一種測定植物中多種激素的方法

在審

• 申請號: 201810245399.8
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108535373A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 胥倩;緹松
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發明公開了一種測定植物中多種激素的方法。包括：將植物樣品于液氮中研磨至粉碎得到粉碎樣品；向樣品中加入丙酮與檸檬酸的混合提取液和內標物，4℃搖床3h得到一次混合物；將一次混合物置于通風櫥內，加蓋錫箔紙過夜后得到二次混合物；向二次混合物中加入乙醚震蕩,第一次離心后留取第一上清液；將第一上清液移至一新離心管內抽真空至干，得到一次干粉狀殘留物，向取完上清后的混合物中加入乙醚，震蕩后第二次離心，留取第二上清液；將第二上清液移至一次干粉狀殘留物所在離心管內,抽真空至干得到二次干粉狀殘留物，向二次干粉中加入甲醇重懸后再過濾，最后采用高效液相色譜?質譜聯用方法進行測定，可同時準確獲得多種植物激素含量。

技術領域

本發明涉及分析化學技術領域，特別涉及一種測定植物中多種激素的方法。

背景技術

植物激素是一類的很重要的信號傳導分子，雖然含量甚微，卻能夠對植物的生長發育具有顯著生理作用。根據結構及性質的不同，可以將植物激素分為以下幾類:生長素、脫落酸、細胞分裂素、赤霉素、乙烯、茉莉酸和水楊酸等。在植物生長發育的不同階段是由不同的激素起特定的作用，并且各種激素之問起著協同連鎖性的作用。因此，開展一種可以同時檢測多種植物激素的方法，對于深入了解植物激素在某些環境脅迫、病蟲害的刺激的產生的應答反應及作物遺傳育種和栽培等領域的研究具有很重的意義。

高效液相色譜是目前分析化學最強大的工具之一，它能夠分離、定性和定量任何可以溶解在液體中的化合物。質譜儀具有很強的組分鑒定能力。兩者聯用是一種分離分析復雜有機混合物的有效手段。隨著高靈敏質譜技術的發展，越來越多基于高效液相色譜一質譜聯用技術(HPLC-MS)的方法建立了起來。植物激素HPLC-MS檢測前需要對材料中的激素進行提取，溶劑提取方法是目前植物激素研究中最常用的方法。然而，由于植物激素在植物體內的含量極低，并且溶劑提取過程中存在大量基質干擾，這對于分析檢測工作具有極大地挑戰性。因此建立一種快速，簡便的樣品前處理方法尤為重要。

發明內容

有鑒于此，本發明實施例提供了一種測定植物中多種激素的方法。

一方面，本發明實施例提供了一種測定植物中多種激素的方法，包括：提取待測植物激素；所述提取待測植物激素的過程為:

將待測植物樣品于液氮中研磨至粉碎，得到粉碎樣品；

向所述粉碎樣品中加入丙酮與檸檬酸的混合提取液和內標物，4℃搖床3h，得到一次混合物；

將所述一次混合物置于通風櫥內，加蓋錫箔紙過夜后得到二次混合物；

向所述二次混合物中加入乙醚，第一次震蕩后進行第一次離心分離，留取第一上清液；

將所述第一上清液移至一新離心管內抽真空至干，得到一次干粉狀殘留物；

向取完上清液后的混合物中加入乙醚，第二次震蕩后進行第二次離心分離，留取第二上清液；

將所述第二上清液移至一次干粉狀殘留物所在離心管內，抽真空至干，得到二次干粉狀殘留物；

所述干粉混合物經甲醇重懸后，再經微米濾頭過濾，最后采用高效液相色譜-質譜聯用方法進行測定分析，同時獲得多種植物激素的含量。

作為優選，所述高效液相色譜的液相條件：

色譜柱：Thermo HYPERSIL GOLD C18色譜柱(2.1×100,3um)；

柱溫：35℃；

流動相：A:0.1％甲酸水，B:甲醇；

洗脫梯度：0-0.2min，A＝90％；0.2-6min，A遞減至10％；6-8min，A＝10％；8-8.1min，A遞增至90％；8.1-10min,A＝90％

進樣體積：7μl。