[發(fā)明專利]一種小型魚(yú)類DNA無(wú)損傷提取方法及DNA提取液

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810244862.7
• 申請(qǐng)日: 2018-03-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108531473A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 封琦;唐晟凱;韓曉磊;顧偉;于正興;陳建寧;王建國(guó);王權(quán)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237
• 代理人: 龔擁軍

1.一種小型魚(yú)類DNA無(wú)損傷提取方法，其特征在于，具體步驟如下：

取棉簽沿魚(yú)體的側(cè)面刮取粘液；

2）將步驟1）獲得的棉簽浸沒(méi)于裝有DNA提取液的離心管中，渦旋10-15s, 室溫靜置15min;

3）將棉簽在管壁上擰干，加入-20℃預(yù)冷后的異丙醇，手動(dòng)混勻3-5次，然后將該樣品置于-80℃溫度下中過(guò)夜或以液氮處理10min；4）取出樣品自然解凍，13000g/min離心10min；棄上清，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%的乙醇，13000g/min離心2min；取沉淀自然干燥，即獲得小型魚(yú)類體表粘液基因組DNA；

所述DNA提取液包括：20mL 1M Tris、5mL 0.5M EDTA、12.5mL 2M NaCl、57.5mL ddH₂O、5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的SDS。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述小型魚(yú)類DNA無(wú)損傷提取方法，其特征在于，步驟1）所述取棉簽沿魚(yú)體的側(cè)面刮取粘液是指：從魚(yú)體一側(cè)的腮蓋后緣向尾部刮取5-10次，然后將魚(yú)翻轉(zhuǎn)，采用相同方法對(duì)魚(yú)體的另一側(cè)刮取粘液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述小型魚(yú)類DNA無(wú)損傷提取方法，其特征在于，所述小型魚(yú)類包括鳑鲏、泰國(guó)斗魚(yú)、草金魚(yú)、孔雀魚(yú)、曼龍、斑馬魚(yú)、稀有鮈鯽、麥穗魚(yú)。

4.一種DNA提取液，其配比如下：20mL 1M Tris、5mL 0.5M EDTA、12.5mL 2M NaCl、57.5mL ddH₂O、5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的SDS。