[發明專利]一種磷酸肌酸鈉的純化方法

有效

• 申請號: 201810244057.4
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN110294775B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 劉珊珊;楊順清;秦永發
• 申請（專利權）人: 安徽古特生物科技有限公司
• 主分類號: C07F9/22
• 分類號: C07F9/22
• 代理公司: 北京中珒知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11806
• 代理人: 王中

本發明公開了一種磷酸肌酸鈉的純化方法，包括以下步驟：1)向酶法制備磷酸肌酸鈉的反應液中添加氫氧化鈉，將反應液的pH值調節至9?11.5，靜止放置1?6小時，棄沉淀留上清液，待用；2)將上清液通過陽離子交換樹脂，收集穿液；3)將穿液通過弱陰離子交換樹脂，收集穿液；4)將穿液通過強陰離子交換樹脂吸附、洗脫磷酸肌酸鈉；5)將磷酸肌酸鈉洗脫液通過納濾濃縮和/或減壓濃縮的方式進行濃縮；6)使用乙醇沉淀磷酸肌酸鈉；7)30?50℃干燥，得成品。本發明的純化流程用于純化酶法生成磷酸肌酸鈉的反應液，純化收率高達90％以上；純化出的磷酸肌酸鈉純度高，達到98.0％以上。

技術領域

本發明涉及化學技術領域，特別涉及一種磷酸肌酸鈉的純化方法。

背景技術

磷酸肌酸是一種高能磷酸化合物，參與人體內能量代謝，維持ATP濃度。磷酸肌酸鈉是其鈉鹽形式，可作為心肌保護作用的藥物，應用于心肌缺血、肥厚、心梗及心衰的治療，尤其是心臟外科手術治療。目前，磷酸肌酸鈉有化學合成法和酶促合成法(簡稱酶法)兩種合成方法，前者反應步驟復雜、條件苛刻、環境污染嚴重，后者通過肌酸激酶催化底物肌酸和ATP一步反應生成磷酸肌酸鈉，具有反應條件溫和、成分穩定易于純化的特點。尤其是近年來ATP再生技術的應用，使磷酸肌酸鈉產量大幅提高，隨之生產成本也大幅降低，因此，酶法生產有進一步取代化工合成法的趨勢。

酶法生產工藝的改進，使反應液成分發生較大變化，磷酸肌酸鈉生成量成倍提高，而ATP含量有可能大量減少，另外，鎂離子等離子在反應液中的濃度也有所變化，原有的磷酸肌酸鈉的純化方法不再適用于新的酶法制備產物的純化。另外，舊有的磷酸肌酸鈉的純化工藝中或者會引入鋇離子等成分，對環境造成污染；或者大量使用乙醇，生產成本過大且存在安全隱患。

因此，酶法生產工藝的進步需要開發新的純化工藝。

發明內容

本發明提供了一種磷酸肌酸鈉的純化方法，通過該方法對酶法制備磷酸肌酸鈉的反應液進行提純，產品純度高，收率高，生產成本低，且節能環保。

本發明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的：

一種磷酸肌酸鈉的純化方法，包括以下步驟：

1)向酶法制備磷酸肌酸鈉的反應液中添加氫氧化鈉，將反應液的pH值調節9-11.5，靜止放置1-6小時，棄沉淀留上清液，待用；

2)將上清液通過陽離子交換樹脂，收集穿液；

3)將穿液通過弱陰離子交換樹脂，收集穿液；

4)將穿液通過強陰離子交換樹脂吸附、洗脫磷酸肌酸鈉；

5)將磷酸肌酸鈉洗脫液通過納濾濃縮和/或減壓濃縮的方式進行濃縮；

6)使用乙醇沉淀磷酸肌酸鈉；

7)30-50℃干燥，得成品。

優選地，上述技術方案中，步驟1)還包括處理上清液：

11)將步驟1)的上清液通過離心和/或過濾的方式去除上清液中的不溶物沉淀；

12)將步驟11)去除沉淀后的上清液進行超濾，去除大分子物質。優選地，超濾膜截留分子量5-100kDa。

優選地，上述技術方案中，所述方法還包括：使用活性炭去除內毒素，所述活性炭使用濃度為0.01-0.5％。

優選地，上述技術方案中，所述步驟1)的反應液為酶法制備磷酸肌酸鈉反應結束后的料液，所述反應液中包含：磷酸肌酸鈉、肌酸、ATP、ADP及AMP的一種或幾種組合、鎂離子、和/或錳離子，以及肌酸激酶。

優選地，上述技術方案中，所述反應液中還包括ATP再生酶。