[發明專利]一種磷酸肌酸鈉的純化方法

有效

• 申請號: 201810244057.4
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN110294775B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 劉珊珊;楊順清;秦永發
• 申請（專利權）人: 安徽古特生物科技有限公司
• 主分類號: C07F9/22
• 分類號: C07F9/22
• 代理公司: 北京中珒知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11806
• 代理人: 王中

1.一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)向酶法制備磷酸肌酸鈉反應液中添加氫氧化鈉，將反應液的pH值調節至9-11.5，靜止放置1-6小時，棄沉淀留上清液，待用；

2)將上清液通過含氨基膦酸基團的陽離子交換樹脂，上樣流速2-6BV/h，收集穿液；

3)將穿液通過含伯胺基、仲胺基或叔胺基基團的弱陰離子交換樹脂，上樣流速2-6BV/h，收集穿液；

4)將穿液通過含季胺基基團的強陰離子交換樹脂吸附，上樣流速1-3BV/h，洗脫磷酸肌酸鈉；

5)將磷酸肌酸鈉洗脫液通過納濾濃縮和/或減壓濃縮的方式進行濃縮；

6)使用乙醇沉淀磷酸肌酸鈉；

7)30-50℃干燥，得成品。

2.根據權利要求1所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，所述步驟1)還包括處理上清液：

11)將步驟1)的上清液通過離心和/或過濾的方式去除上清液中的不溶物沉淀；

12)將步驟11)去除沉淀后的上清液進行超濾，去除大分子物質。

3.根據權利要求1所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，所述方法還包括：使用活性炭去除內毒素，所述活性炭使用濃度為0.01-0.5％。

4.根據權利要求1所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，所述步驟1)的反應液為酶法制備磷酸肌酸鈉反應結束后的料液，所述反應液中包含：磷酸肌酸鈉、肌酸、ATP、ADP及AMP的一種或幾種組合、鎂離子、和/或錳離子，以及肌酸激酶。

5.根據權利要求4所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，所述反應液中還包括鋅離子、鉀離子、鈣離子、銨離子、氯離子、磷酸根、硫酸根及醋酸根中的一種或多種組合，和/或ATP再生酶。

6.根據權利要求2所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，所述步驟12)中超濾膜截留分子量5-100kDa。

7.根據權利要求1所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，

步驟2)中使用的陽離子交換樹脂為LX-160、D860或LSC-500；

步驟3)中使用的弱陰離子交換樹脂為D315、D351或D354；

步驟4)中使用的強陰離子交換樹脂為711、717、D201、D202、D293、D296、LX-67或LX-958。

8.根據權利要求1所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，所述步驟4)的洗脫過程包括：

41)純水洗脫，洗脫流速1-6BV/h；

42)20-80mM NaCl洗脫，除掉肌酸等雜質，洗脫流速1-6BV/h；

43)100-300mM NaCl洗脫磷酸肌酸鈉，洗脫流速1-6BV/h，收集此步穿液。

9.根據權利要求1所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，所述步驟5)中納濾膜的截留分子量為200-300，磷酸肌酸鈉濃縮后的濃度為200-500mM。

10.根據權利要求1所述的一種磷酸肌酸鈉的純化方法，其特征在于，所述6)中乙醇的濃度為70-90％，溫度范圍-15℃-15℃。