[發明專利]一種結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑及其藥敏檢測方法

在審

• 申請號: 201810243652.6
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108179173A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 余曉麗;孫戰強;張舒林
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國

本發明公開一種結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑及其藥敏檢測方法，所述結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑包括3,3'?[1?(苯氨酰基)?3,4?四氮唑]?二(4?甲氧基?6?硝基)苯磺酸鈉、以及1?甲氧基?5?甲基酚嗪硫酸甲酯。本發明提供的結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，通過3,3'?[1?(苯氨酰基)?3,4?四氮唑]?二(4?甲氧基?6?硝基)苯磺酸鈉與菌體的氧化還原代謝產物反應產生可溶性甲臢，然后經過中間電子受體1?甲氧基?5?甲基酚嗪硫酸甲酯介導快速透過細胞膜，從而實現結核分枝桿菌的快速藥敏檢測。

技術領域

本發明涉及藥物檢測技術領域，特別涉及一種結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑及其藥敏檢測方法。

背景技術

結核病是全球范圍內的重大傳染病之一，由于不正規用藥等原因，耐多藥結核病和廣泛耐藥結核病的比例快速上升，而結核分枝桿菌的耐藥機理復雜，基于耐藥突變基因的分子生物學方法并不能完全滿足臨床要求，因此，細菌學藥敏檢測和最低抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC)的測定成為抗結核新藥篩選和個體化精準治療的重要手段，其中，在細菌學藥敏檢測過程中，需要使用培養基對結核桿菌進行培養，而基于現有培養基的結核分枝桿菌藥敏檢測一般至少需耗時1周，檢測周期較長，不利于結核分枝桿菌藥敏檢測的快速進行。

發明內容

本發明的主要目的是提出一種結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑及其藥敏檢測方法，旨在縮短結核分枝桿菌藥敏檢測的檢測周期。

為實現上述目的，本發明提出一種結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，包括：

3,3'-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸鈉、以及1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯。

優選地，所述3,3'-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸鈉和1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯的濃度對應為0.2mM和0.04mM。

本發明還提出一種結核分枝桿菌藥敏檢測方法，所述結核分枝桿菌藥敏檢測方法使用如上所述的結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑進行，包括以下步驟：

用液體培養基培養結核分枝桿菌，得到結核分枝桿菌菌液；

將待測藥物用液體培養基配制成藥物溶液；

將藥物溶液和結核分枝桿菌菌液混合后進行恒溫培養，并于恒溫培養第5天加入結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，根據結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑的顏色變化來判斷結核分枝桿菌對待測藥物的敏感性。

優選地，用液體培養基培養結核分枝桿菌，得到結核分枝桿菌菌液的步驟，具體包括：

將結核分枝桿菌菌株活化后，挑取單菌落轉移至7H9液體培養基中培養至結核分枝桿菌生長至對數期時，吸取菌液，用2～4mm的玻璃珠旋渦振蕩2～5min，取上層懸濁液用7H9液體培養基比濁至0.5麥氏濁度，得到結核分枝桿菌菌液，其中，所述7H9液體培養基中含有0.05％的吐溫80和10％的OADC。

優選地，所述結核分枝桿菌菌液的濃度為2.4×10⁷～7.5×10⁸CFU/mL。

優選地，將待測藥物用液體培養基配制成藥物溶液的步驟，具體包括：

以7H9液體培養基為溶劑，將待測藥物配制成不同濃度梯度的藥物溶液，其中，所述7H9液體培養基中含有0.05％的吐溫80和10％的OADC增菌液。

優選地，將藥物溶液和結核分枝桿菌菌液混合后進行恒溫培養，然后加入結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，繼續培養，根據結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑的顏色變化來判斷結核分枝桿菌對待測藥物的敏感性的步驟中：

所述藥物溶液、結核分枝桿菌菌液以及結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑的體積比為5：5：1。