[發明專利]一種結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑及其藥敏檢測方法

在審

• 申請號: 201810243652.6
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108179173A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 余曉麗;孫戰強;張舒林
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國

1.一種結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，其特征在于，包括：

3,3'-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸鈉、以及1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯。

2.如權利要求1所述的結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，其特征在于，所述3,3'-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸鈉和1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯的濃度對應為0.2mM和0.04mM。

3.一種結核分枝桿菌藥敏檢測方法，其特征在于，所述結核分枝桿菌藥敏檢測方法使用如權利要求1或2所述的結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑進行，包括以下步驟：

用液體培養基培養結核分枝桿菌，得到結核分枝桿菌菌液；

將待測藥物用液體培養基配制成藥物溶液；

將藥物溶液和結核分枝桿菌菌液混合后進行恒溫培養，并于恒溫培養第5天加入結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，根據結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑的顏色變化來判斷結核分枝桿菌對待測藥物的敏感性。

4.如權利要求3所述的結核分枝桿菌藥敏檢測方法，其特征在于，用液體培養基培養結核分枝桿菌，得到結核分枝桿菌菌液的步驟，具體包括：

將結核分枝桿菌菌株活化后，挑取單菌落轉移至7H9液體培養基中培養至結核分枝桿菌生長至對數期時，吸取菌液，用2～4mm的玻璃珠旋渦振蕩2～5min，取上層懸濁液用7H9液體培養基比濁至0.5麥氏濁度，得到結核分枝桿菌菌液，其中，所述7H9液體培養基中含有0.05％的吐溫80和10％的OADC。

5.如權利要求3所述的結核分枝桿菌藥敏檢測方法，其特征在于，所述結核分枝桿菌菌液的濃度為2.4×10⁷～7.5×10⁸CFU/mL。

6.如權利要求3所述的結核分枝桿菌藥敏檢測方法，其特征在于，將待測藥物用液體培養基配制成藥物溶液的步驟，具體包括：

以7H9液體培養基為溶劑，將待測藥物配制成不同濃度梯度的藥物溶液，其中，所述7H9液體培養基中含有0.05％的吐溫80和10％的OADC增菌液。

7.如權利要求3所述的結核分枝桿菌藥敏檢測方法，其特征在于，將藥物溶液和結核分枝桿菌菌液混合后進行恒溫培養，并于恒溫培養第5天加入結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，根據結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑的顏色變化來判斷結核分枝桿菌對待測藥物的敏感性的步驟中：

所述藥物溶液、結核分枝桿菌菌液以及結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑的體積比為5：5：1。

8.如權利要求3所述的結核分枝桿菌藥敏檢測方法，其特征在于，將藥物溶液和結核分枝桿菌菌液混合后進行恒溫培養，并于恒溫培養第5天加入結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，根據結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑的顏色變化來判斷結核分枝桿菌對待測藥物的敏感性的步驟，包括：

將藥物溶液置于孔板的試驗孔中，然后向含有藥物溶液的試驗孔中加入結核分枝桿菌菌液，于37℃溫度下進行恒溫培養；

于恒溫培養第5天，向試驗孔中加入結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑，繼續恒溫培養4～24h后，觀察結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑是否出現顏色變化，若結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑出現顏色變化，判定為所述結核分枝桿菌對所述待測藥物具有耐藥性，若結核分枝桿菌藥敏檢測顯色劑無顏色變化，判定為所述結核分枝桿菌對所述待測藥物敏感。