[發(fā)明專利]一種生物分子的電化學(xué)檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810243420.0 | 申請日： | 2018-03-23 |
| 公開（公告）號： | CN108445063B | 公開（公告）日： | 2020-11-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 趙永祥;黃勇;鐘莉娉 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西醫(yī)科大學(xué) |
| 主分類號： | G01N27/30 | 分類號： | G01N27/30;G01N27/327 |
| 代理公司： | 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 韋肖燕 |
| 地址： | 530021 廣西壯*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 生物 分子 電化學(xué) 檢測 方法 | ||
本發(fā)明公開一種生物分子的電化學(xué)檢測方法，屬于生物分子檢測技術(shù)領(lǐng)域。所述方法首先合成出具有電活性的二茂鐵酪胺分子，然后通過還原法制備出石墨烯/血紅素復(fù)合納米材料，所述材料在H2O2的存在下能觸發(fā)二茂鐵修飾酪氨在電極表面的催化沉積反應(yīng)，導(dǎo)致具有電活性的二茂鐵分子在電極表面大量聚集，而產(chǎn)生增強(qiáng)的氧化還原電流。在生物分子檢測過程中，檢測到的氧化還原電流與生物分子的量在一定范圍內(nèi)成線性關(guān)系。通過電化學(xué)工作站檢測所產(chǎn)生的氧化還原電流的大小，即可實(shí)現(xiàn)對生物分子的電化學(xué)檢測。本發(fā)明建立的生物分子的電化學(xué)檢測方法具有靈敏、操作簡單、檢測時間短等優(yōu)點(diǎn)。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物分子檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于石墨烯/血紅素類過氧化酶復(fù)合納米材料電化學(xué)高靈敏檢測p53等蛋白的方法。
背景技術(shù)
電化學(xué)生物傳感技術(shù)是采用固體電極作基礎(chǔ)電極，將生物敏感分子固定在電極表面，然后通過生物分子間的特異性識別作用，生物敏感分子能選擇性地識別目標(biāo)分子并將目標(biāo)分子捕獲到電極表面，基礎(chǔ)電極作為信號傳導(dǎo)器將電
極表面發(fā)生的識別反應(yīng)信號導(dǎo)出，變成可以測量的電信號，從面實(shí)現(xiàn)對分析目標(biāo)物進(jìn)行定量或定性分析的目的，其由于所需儀器簡單、選擇性好、分析速度快、檢測成本低、易于實(shí)現(xiàn)微型化等優(yōu)點(diǎn)，在生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測、食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
基于HRP酶催化酪胺沉積的信號放大技術(shù)，其主要原理是辣根過氧化物酶（HRP）H2O2存在下催化酪胺鹽，形成共價鍵結(jié)合位點(diǎn)，在15 min內(nèi)大量的標(biāo)記物沉積在要放大的信號位點(diǎn)上，使原始信號得到幾何級的放大。
生物酶是從生物體中產(chǎn)生的，具有特殊的催化功能的蛋白質(zhì)，由氨基酸長鏈組成。在受到紫外線、熱、射線、表面活性劑、金屬鹽、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿及其它化學(xué)試劑如氧化劑、還原劑等因素影響時，酶蛋白的二級、三級結(jié)構(gòu)有所改變，使其酶活性降低，甚至失活。
本發(fā)明利用基于納米材料的擬酶代替生物酶，開發(fā)了一種利用基于石墨烯/血紅素類過氧化酶復(fù)合納米材料催化二茂鐵酪胺沉積信號放大原理的電化學(xué)生物傳感技術(shù)，用于生物分子的高靈敏檢測。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種二茂鐵酪胺電活性物質(zhì)及制備方法，并利用該物質(zhì)來對生物分子進(jìn)行電化學(xué)檢測。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的技術(shù)方案為：
一種生物分子的電化學(xué)檢測方法，包括制備石墨烯/血紅素類過氧化酶復(fù)合納米材料、制備二茂鐵酪胺、制備適配體功能化復(fù)合材料、電極修飾和生物分子檢測；
所述制備石墨烯/血紅素類過氧化酶復(fù)合納米材料的步驟為：按質(zhì)量比為1:15的比例分別稱取石墨烯和血紅素后，將石墨烯配置成石墨烯溶液，將血紅素配置成血紅素溶液，將兩份溶液混合后，加入NH2-NH2，渦旋10-15 min后，60-65℃水浴3-5 h，15000-20000r/min離心25-35 min，所得沉淀用超純水洗滌，凍干，即得到石墨烯/血紅素類過氧化酶復(fù)合納米材料；
所述制備二茂鐵酪胺的步驟為：取二茂鐵甲酸于無水CH2Cl2溶解，0oC下緩緩滴加Et3N，再依次加入HBTU和HOBt，0oC反應(yīng)10-15 h，溶液由黃色變?yōu)榧t色，旋轉(zhuǎn)蒸干，層析純化，得到紅褐色活化物，將其溶于THF后，取酪胺溶于硼酸緩沖溶液，0oC混合上述兩種溶液并調(diào)pH至9-10，反應(yīng)8-10 h后，室溫反應(yīng)20-24 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去THF，余下水相用EtOAc萃取一次后，將水相調(diào)pH至1-2，EtOAc再次萃??；將所得兩次萃取液合并，過濾、無水Na2SO4除水、再次過濾后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，所得產(chǎn)物用展開劑溶解，柱層析進(jìn)行純化，最后于35-40oC水浴鍋中干燥即可得到二茂鐵酪胺；
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