[發明專利]一種檢驗檢疫蜂群中感染短膜蟲的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201810241647.1
• 申請日: 2018-03-22
• 公開（公告）號: CN108251543A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 李繼蓮;吳杰;王劉豪;羅術東;黃家興;楊慧鵬;靳婷婷
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蜜蜂研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種檢驗檢疫蜂群中感染短膜蟲的方法，包括以下步驟：提取待檢驗蜂樣品的腸道DNA，用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示特異性引物序列進行PCR擴增，擴增產物用瓊脂糖凝膠電泳檢測，若能夠擴增出417bp的基因片段，則待檢驗蜂群中感染了短膜蟲。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述短膜蟲為熊蜂短膜蟲和蜜蜂短膜蟲。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述PCR的反應體系為25μl反應體系，所述25μl PCR的反應體系中含有5μl Buffer，1.5μl 25mM的MgCl₂，2.0μl 200μM的dNTPs，10μM序列為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的引物各1μl，0.625U/管的DNA聚合酶，5μl 5ng/μl的模板DNA，余量的ddH₂O。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述PCR的反應條件為：95℃預變性4min后進入循環：95℃變性1min，56℃退火1min，72℃延伸1min，32個循環，最后72℃延伸10min。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述用于瓊脂糖凝膠電泳的擴增產物體積為5～10μl。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述蜂群為熊蜂或蜜蜂。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述蜜蜂為中華蜜蜂。

8.一種檢驗檢疫蜂群中感染短膜蟲的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有PCRBuffer，20～30mM的MgCl₂，150～250μM的dNTPs，8～15μM序列為SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2的引物，0.5～0.8U的DNA聚合酶，ddH₂O。