[發(fā)明專利]一種同時測定血漿中血必凈注射液有效成分的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810241176.4
• 申請日: 2018-03-22
• 公開（公告）號: CN108508107B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 潘桂湘;王獻瑞;王曉明;郭亞卿;胡鳳英;袁圓;朱彥
• 申請（專利權(quán)）人: 天津中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/54
• 代理公司: 太原倍智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 14111
• 代理人: 張宏

1.一種同時測定血漿中血必凈注射液有效成分的方法，所述有效成分包括迷迭香酸、芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基紅花黃色素A，其特征在于，包括步驟：

（1）樣品的制備和（2）采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，多反應(yīng)監(jiān)測掃描；

所述步驟（1）包括：

a）向待測血漿樣品中加入抗氧化劑、有機酸和內(nèi)標溶液，混勻，所述有機酸為甲酸或乙酸中的一種，內(nèi)標溶液為氯霉素溶液，所述待測血漿樣品與抗氧化劑的體積比為10:1；所述的抗氧化劑為抗壞血酸或維生素E，濃度為4 mg·mL^-1；所述氯霉素溶液濃度為1 μg·mL^-1；

b）加入極性有機溶劑，混勻，離心，去除蛋白；所述極性有機溶劑為甲醇、乙腈或甲醇-乙腈混合液，所述待測血漿樣品與極性有機溶劑的體積比為1:3~1:5；

c）吸取有機溶液層，揮干；

d）加入30~50%甲醇水溶液復(fù)溶，混勻，離心，取上清液；

所述步驟（2）液相色譜條件為：色譜柱為C18柱；流動相A為水或含有0.05~0.3vt.%的甲酸水溶液，流動相B為甲醇或含0.05~0.1vt.%甲酸的乙腈，流速為0.2~0.5mL/min，梯度線性洗脫，柱溫設(shè)定為15~40℃；

所述步驟（2）質(zhì)譜檢測條件為：采用電噴霧負離子檢測模式；毛細管電壓(Capillary)：0.5~4kV；錐孔電壓(Cone Voltage）：1~90V；噴霧氣壓力(Nebuliser)：5~10Bar；脫溶劑氣溫度(Desolvation Temp)：350~550℃；脫溶劑氣流量(Desolvation Gas Flow)：500~1000L·h^-1；錐孔氣流量(Cone Gas Flow)：100~200L·h^-1；碰撞氣氬氣流量(Collision GasFlow)：0.1~0.3mL·min^-1；入口電壓（Enter Potential）：8~40V；去簇電壓（DeclusteringPotential）：5~200V；碰撞室出口電壓（Cell Exit Potential）：5~20V；

所述多反應(yīng)監(jiān)測掃描方法的參數(shù)如下，

氯霉素(CAP)：母離子質(zhì)量數(shù)（Q1）：321.03/320.9；子離子質(zhì)量數(shù)（Q3）：160.89/160.9；錐孔電壓（Cone Voltage）：30~60V；駐留時間（Dewll Time）：23~25ms；碰撞能量（CollisionEnergy）：10~30 V；入口電壓（Enter Potential）：10~20V；去簇電壓（DeclusteringPotential）：50~80V；碰撞室出口電壓（Cell Exit Potential）：10~20V；

芍藥苷(PE)：母離子質(zhì)量數(shù)（Q1）：525.17/525.2；子離子質(zhì)量數(shù)（Q3）：449.10/120.8；錐孔電壓（Cone Voltage）：20~40V；駐留時間（Dewll Time）：23~25ms；碰撞能量（CollisionEnergy）：10~50V；入口電壓（Enter Potential）：10~20V；去簇電壓（DeclusteringPotential）：60~80V；碰撞室出口電壓（Cell Exit Potential）：5~10V；

氧化芍藥苷(Oxy-PE)：母離子質(zhì)量數(shù)（Q1）：494.97/495.1；子離子質(zhì)量數(shù)（Q3）：136.97/136.8；錐孔電壓（Cone Voltage）：1~10V；駐留時間（Dewll Time）：23~25ms；碰撞能量（Collision Energy）：20~50V；入口電壓（Enter Potential）：10~20V；去簇電壓（Declustering Potential）：110~130V；碰撞室出口電壓（Cell Exit Potential）：5~10V；

苯甲酰芍藥苷(Ben-PE)：母離子質(zhì)量數(shù)（Q1）：583.2/583.1；子離子質(zhì)量數(shù)（Q3）：120.7/120.98；錐孔電壓（Cone Voltage）：60~90V；駐留時間（Dewll Time）：23~25ms；碰撞能量（Collision Energy）：20~40V；入口電壓（Enter Potential）：10~20V；去簇電壓（Declustering Potential）：110~130V；碰撞室出口電壓（Cell Exit Potential）：5~10V；

芍藥內(nèi)酯苷(AF)：母離子質(zhì)量數(shù)（Q1）：525.10/525.2；子離子質(zhì)量數(shù)（Q3）：478.93/120.8；錐孔電壓（Cone Voltage）：30~60V；駐留時間（Dewll Time）：23~25ms；碰撞能量（Collision Energy）：10~50V；入口電壓（Enter Potential）：10~20V；去簇電壓（Declustering Potential）：70~100V；碰撞室出口電壓（Cell Exit Potential）：5~8V；

羥基紅花黃色素A(HSYA)：母離子質(zhì)量數(shù)（Q1）：611.12/611.2；子離子質(zhì)量數(shù)（Q3）：402.96/491.0；錐孔電壓（Cone Voltage）：60~90V；駐留時間（Dewll Time）：23~25ms；碰撞能量（Collision Energy）：20~40V；入口電壓（Enter Potential）：10~40V；去簇電壓（Declustering Potential）：140~160V；碰撞室出口電壓（Cell Exit Potential）：8~13V；

迷迭香酸(RA)：母離子質(zhì)量數(shù)（Q1）：359.03/359.18/359.03/358.9；子離子質(zhì)量數(shù)（Q3）：160.89/197.14/79.20/160.9；錐孔電壓（Cone Voltage）：20~50V；駐留時間（DewllTime）：23~25ms；碰撞能量（Collision Energy）：10~30V；入口電壓（Enter Potential）：8~15V；去簇電壓（Declustering Potential）：40~70V；碰撞室出口電壓（Cell ExitPotential）：13~17V；

梯度線性洗脫系統(tǒng)程序為：0~0.60min，95%A、5%B；0.60~0.61min，85%A、15%B；0.61~2.30min，35%A、65%B；2.30~2.50min，5%A、95%B；2.50~3.00min，5%A、95%B；3.00~3.01min，95%A、5%B；3.01~4.00min，95%A、5%B；

目標化合物的最低定量限0.1~1 ng·mL^-1。