[發(fā)明專利]一種雞白痢染色凝集抗原及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810237850.1
• 申請日: 2018-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN108414751A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡明明;王治維;郎小兵;劉林青;白艷艷;張仲萍;楊治平;王棟;郭永江;王云堂;楊玉翠
• 申請（專利權(quán)）人: 山西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心;廣州動(dòng)佰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 六安市新圖匠心專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34139
• 代理人: 朱小杰

本發(fā)明屬于獸醫(yī)診斷領(lǐng)域，尤其是一種雞白痢染色凝集抗原及其制備方法，針對(duì)現(xiàn)有對(duì)內(nèi)部雜菌的滅菌效果差，進(jìn)而對(duì)雞白痢染色凝集抗原的純凈度產(chǎn)生不利影響的問題，現(xiàn)提出如下方案，其制備方法包括以下步驟：S1：將雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79?6、C79?11?S11和SP8441分別利用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)蘇繁殖，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的培養(yǎng)時(shí)間設(shè)置為20?23h，得到雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79?6、C79?11?S11和SP8441所對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)液，本發(fā)明中的一級(jí)種子液和二級(jí)種子液均進(jìn)行不同的滅菌操作，且在二級(jí)種子液再次進(jìn)行滅菌之前新增了篩選操作，使得雞白痢染色凝集抗原的滅菌效果和純凈度均得到了極大的提高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及獸醫(yī)診斷技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種雞白痢染色凝集抗原及其制備方法。

背景技術(shù)

雞白痢是由雞白痢沙門氏菌引起的傳染性疾病，世界各地均有發(fā)生，是危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一，雞白痢的主要癥狀：雛雞表現(xiàn)不吃飼料，怕冷，身體蜷縮，翅膀下垂，精神沉郁或昏睡，排白色粘稠或淡黃、淡綠色稀便，肛門有時(shí)被硬結(jié)的糞塊封閉，呼吸困難；成年雞表現(xiàn)精神萎靡，排黃綠色或蛋清樣稀便，主要病變可見肝臟、脾臟腫大、脆弱，有壞死點(diǎn)，腎臟暗紅充血或蒼白貧血，常出現(xiàn)腹膜炎變化。為了保障雞的正常生長，通常使用多價(jià)染色平板凝集試驗(yàn)抗原進(jìn)行檢測，但是該抗原在實(shí)際使用中存在敏感度低、診斷速度慢和凝集圖像不清晰的問題。

為了解決多價(jià)染色平板凝集試驗(yàn)抗原所存在敏感度低、診斷速度慢和凝集圖像不清晰的問題，人們提出了專利公布號(hào)為“CN104789500A”的一種雞白痢染色凝集抗原及其制備方法和應(yīng)用，該專利具有敏感度高、診斷速度快和凝集圖像清晰的優(yōu)點(diǎn)，但是該專利中僅通過滅菌紗布進(jìn)行過濾滅菌處理，使得滅菌效果較差，進(jìn)而對(duì)雞白痢染色凝集抗原的純凈度產(chǎn)生不利的影響。

為了解決專利公告號(hào)“CN104789500A”的一種雞白痢染色凝集抗原及其制備方法和應(yīng)用所存在的問題，提出了一種雞白痢染色凝集抗原及其制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出的一種雞白痢染色凝集抗原及其制備方法，解決了對(duì)內(nèi)部雜菌的滅菌效果差，進(jìn)而對(duì)雞白痢染色凝集抗原的純凈度產(chǎn)生不利影響的問題。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

一種雞白痢染色凝集抗原，由雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、 C79-11-S11和SP8441制成，所述雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、 C79-11-S11和SP8441均在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏。

優(yōu)先的，所述雞白痢染色凝集抗原含有的細(xì)胞濃度為1.5× 10¹⁰CFU/ml，且其中雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11 和SP8441的細(xì)胞數(shù)量分別為15％、25％、55％和5％。

本發(fā)明還提出了一種雞白痢染色凝集抗原的制備方法，包括以下步驟：

S1：將雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441 分別利用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)蘇繁殖，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的培養(yǎng)時(shí)間設(shè)置為20-23h，得到雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11 和SP8441所對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)液；

S2：S1中所述的四種不同的培養(yǎng)液分別接種在SS瓊脂培養(yǎng)基中， SS瓊脂培養(yǎng)基所接種的培養(yǎng)液均在恒溫箱的內(nèi)部放置44-46h，且恒溫箱內(nèi)部的溫度設(shè)置為38-40℃；

S3：S2中所述的SS瓊脂培養(yǎng)基分別利用生理鹽水洗下菌苔，得到一級(jí)種子液，然后一級(jí)種子液利用紫外線照射燈，在34-36℃下進(jìn)行照射10-20min；

S4：S3中所述的一級(jí)種子液分別接種在SS瓊脂培養(yǎng)基中，SS瓊脂培養(yǎng)基所接種的培養(yǎng)液均在恒溫箱的內(nèi)部放置44-46h，且恒溫箱內(nèi)部的溫度設(shè)置為38-40℃；