[發(fā)明專利]一種雞白痢染色凝集抗原及其制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810237850.1 | 申請日： | 2018-03-22 |
| 公開（公告）號： | CN108414751A | 公開（公告）日： | 2018-08-17 |
| 發(fā)明（設計）人： | 胡明明;王治維;郎小兵;劉林青;白艷艷;張仲萍;楊治平;王棟;郭永江;王云堂;楊玉翠 | 申請（專利權）人： | 山西省動物疫病預防控制中心;廣州動佰生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 六安市新圖匠心專利代理事務所(普通合伙) 34139 | 代理人： | 朱小杰 |
| 地址： | 030000 山*** | 國省代碼： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 凝集 抗原 染色 制備 純凈度 雞白痢沙門氏菌 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 二級種子液 滅菌效果 雞白痢 滅菌 白痢 種雞 菌種 培養(yǎng)液 產生不利影響 一級種子液 時間設置 獸醫(yī)診斷 雜菌 繁殖 復蘇 篩選 | ||
1.一種雞白痢染色凝集抗原，其特征在于，由雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441制成，所述雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441均在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種雞白痢染色凝集抗原，其特征在于，所述雞白痢染色凝集抗原含有的細胞濃度為1.5×1010CFU/ml，且其中雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441的細胞數(shù)量分別為15%、25%、55%和5%。
3.一種雞白痢染色凝集抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1：將雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441分別利用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基進行復蘇繁殖，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的培養(yǎng)時間設置為20-23h，得到雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441所對應的培養(yǎng)液；
S2：S1中所述的四種不同的培養(yǎng)液分別接種在SS瓊脂培養(yǎng)基中，SS瓊脂培養(yǎng)基所接種的培養(yǎng)液均在恒溫箱的內部放置44-46h，且恒溫箱內部的溫度設置為38-40℃；
S3：S2中所述的SS瓊脂培養(yǎng)基分別利用生理鹽水洗下菌苔，得到一級種子液，然后一級種子液利用紫外線照射燈，在34-36℃下進行照射10-20min；
S4：S3中所述的一級種子液分別接種在SS瓊脂培養(yǎng)基中，SS瓊脂培養(yǎng)基所接種的培養(yǎng)液均在恒溫箱的內部放置44-46h，且恒溫箱內部的溫度設置為38-40℃；
S5：S4中所述的SS瓊脂培養(yǎng)基分別利用鹽酸生理鹽水洗下菌苔，并利用鹽酸進行酸化處理，得到二級種子液，并置于無菌瓶中，無菌瓶放置到30-32℃的水中，且放置時間設置為20-25min，最后將無菌瓶外側的水跡進行擦拭干凈；
S6：利用光學顯微鏡對S5中所述的無菌瓶中的二級種子液進行觀察，篩選出內部暫無雜菌的無菌瓶；
S7：S6中所述的無菌瓶所放置的二級種子液放置到除菌箱中，除菌箱利用其內部的氦氖激光器對無菌瓶所放置的二級種子液進行2-4次照射，且氦氖激光器的每次照射時間均設置為25-30min，得到滅菌的二級種子液；
S8：S7中所述的經過滅菌處理的二級種子液在冰箱的內部放置21-23h，且冰箱的內部溫度設置為2-4℃，得到滅活的二級種子液；
S9：S8中所述的二級種子液利用離心設備去除上清液，得到懸浮的菌泥，然后菌泥利用生理鹽水通過濁法配置成1.5×1010CFU/ml的菌液；
S10：S9中所述的菌液同時加入革蘭氏染液和石碳酸復紅染液進行染色，然后加入染液后的菌液進行搖勻，最后在35℃的恒溫箱內進行放置44-46h，得到染色抗原；
S11：S10中的分別對應雞白痢沙門氏菌菌種S0808、C79-6、C79-11-S11和SP8441的染色抗原按照以下質量比例混合：雞白痢沙門氏菌菌種S0808為15%、雞白痢沙門氏菌菌種C79-6為25%、雞白痢沙門氏菌菌種C79-11-S11為55%、雞白痢沙門氏菌菌種SP8441為5%，混合后的染色抗原利用轉速為3500-4500r/min的離心設備進行均勻搖晃，且離心設備的離心時間設置為20-40min，得到雞白痢染色凝集抗原。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種雞白痢染色凝集抗原的制備方法，其特征在于，所述S1中，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基為改良性馬丁肉湯，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的PH值為6.5-6.8，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放置于干燥箱中，且干燥箱的內部溫度設置為38-40℃。
5.根據(jù)權利要求3所述的一種雞白痢染色凝集抗原的制備方法，其特征在于，所述S2中，恒溫箱的最佳放置時間為45h，且恒溫箱的最佳內部溫度設置為39℃。
6.根據(jù)權利要求3所述的一種雞白痢染色凝集抗原的制備方法，其特征在于，所述S3中，生理鹽水均為0.4-0.6%濃度的福爾馬林生理鹽水。
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