[發(fā)明專利]發(fā)酵蟲草菌粉及制劑甾醇類HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法及其指紋圖譜

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810236777.6
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108535372B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳麗華;朱衛(wèi)豐;管詠梅;楊明;金晨;趙加茜
• 申請（專利權(quán)）人: 江西國藥有限責(zé)任公司;江西中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為;孟旭

本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及發(fā)酵蟲草菌粉的質(zhì)量控制方法，具體涉及發(fā)酵蟲草菌粉及其制劑甾醇類HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法及其指紋圖譜。本發(fā)明所述方法，包括以下步驟：(1)對照品溶液的制備；(2)供試品溶液的制備；(3)HPLC測定指紋圖譜及相似度評價：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液，HPLC分離檢測，流動相為甲醇?水洗脫系統(tǒng)，得到發(fā)酵蟲草菌粉甾醇指紋圖譜，將得到的指紋圖譜導(dǎo)入相似度軟件評價系統(tǒng)進(jìn)行相似度評價。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及發(fā)酵蟲草菌粉的質(zhì)量控制方法，具體涉及發(fā)酵蟲草菌粉及其制劑甾醇類HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法及其指紋圖譜。

背景技術(shù)

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌(Cordyceps sinensis)寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復(fù)合體，是我國的名貴中藥材之一。由于對冬蟲夏草資源的過度開發(fā)，加上其寄主的專一性和環(huán)境的局限，冬蟲夏草資源日漸枯竭。發(fā)酵蟲草菌粉是從冬蟲夏草中分離出藥用菌株，經(jīng)過深層發(fā)酵得到的菌粉，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵蟲草菌粉具有冬蟲夏草相似的化學(xué)成分和藥理作用，因此可作為冬蟲夏草的替代品使用。

發(fā)酵蟲草菌粉含有核苷類、甾醇類、多糖類等化學(xué)成分，營養(yǎng)和藥用價值豐富。目前對于發(fā)酵蟲草菌粉及其制劑質(zhì)量控制以核苷類化學(xué)成分為主，而甾醇類化合物卻很少被作為質(zhì)量控制目標(biāo)物，對發(fā)酵蟲草菌粉甾醇類化合物指紋圖譜的研究更是鮮有報道，造成缺乏完善的質(zhì)量評價體系，難以達(dá)到對發(fā)酵蟲草菌粉及其制劑質(zhì)量的有效控制。

中藥指紋圖譜技術(shù)是一種綜合地反映中藥多成分特征的質(zhì)量控制模式，能夠準(zhǔn)確地評價中藥材質(zhì)量的均一性、療效和穩(wěn)定性，具有整體性和模糊性等特點(diǎn)，是國內(nèi)外公認(rèn)的中藥質(zhì)量評價體系之一。

為此，我們結(jié)合中藥指紋圖譜技術(shù)，并經(jīng)過長時間的努力研究得到一種發(fā)酵蟲草菌粉甾醇的指紋圖譜的構(gòu)建方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種發(fā)酵蟲草菌粉甾醇的指紋圖譜的構(gòu)建方法。

完善現(xiàn)有發(fā)酵蟲草菌粉質(zhì)量評價體系，通過建立發(fā)酵蟲草菌粉甾醇類指紋圖譜的方法，并由此得到發(fā)酵蟲草菌粉甾醇類共有模式指紋圖譜。

本發(fā)明所述發(fā)酵蟲草菌粉甾醇的指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備

分別精密稱取麥角甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇和胡蘿卜苷適量，置于同一容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，即得對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備

稱取蟲草菌粉適量，加入醇溶液超聲提取，取出冷卻至常溫后，離心，取上清液過微孔濾膜，過濾液加入醇溶液定容，取定容后的提取液加入氫氧化鉀-甲醇溶液混合均勻，水浴皂化反應(yīng)完成后取出放冷，過微孔濾膜后即得供試品溶液；

(3)HPLC測定指紋圖譜及相似度評價

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液，HPLC分離檢測，流動相為甲醇-水洗脫系統(tǒng)，得到發(fā)酵蟲草菌粉甾醇指紋圖譜，將得到的指紋圖譜導(dǎo)入相似度軟件評價系統(tǒng)進(jìn)行相似度評價；

其中，步驟(3)所述的HPLC條件為：C₁₈色譜柱，流動相為甲醇-水，梯度洗脫。

優(yōu)選的，本發(fā)明所述的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備

分別精密稱取麥角甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇和胡蘿卜苷適量，置于同一10mL容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，定容至刻度，即得對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備