[發明專利]發酵蟲草菌粉及制劑甾醇類HPLC指紋圖譜的構建方法及其指紋圖譜

有效

• 申請號: 201810236777.6
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108535372B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 陳麗華;朱衛豐;管詠梅;楊明;金晨;趙加茜
• 申請（專利權）人: 江西國藥有限責任公司;江西中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為;孟旭

1.一種發酵蟲草菌粉甾醇的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備；

(2)供試品溶液的制備；

(3)HPLC測定指紋圖譜及相似度評價；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液，HPLC分離檢測，流動相為甲醇-水洗脫系統，得到發酵蟲草菌粉甾醇指紋圖譜，將得到的指紋圖譜導入相似度軟件評價系統進行相似度評價；

其中，步驟(1)對照品溶液的制備：分別精密稱取麥角甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇和胡蘿卜苷適量，置于同一容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，即得對照品溶液；其中，對照品溶液濃度為：麥角甾醇122μg/mL、豆甾醇119μg/mL、β-谷甾醇114μg/mL、胡蘿卜苷113μg/mL；

其中，步驟(2)所述的供試品的制備：稱取發酵蟲草菌粉1.5g，加入甲醇10ml超聲提取60min，取出冷卻至常溫后，8000r/min離心10min，取上清液過0.22μm微孔濾膜，過濾液用甲醇定容至10ml，取定容后的提取液0.9ml，加入濃度為0.4mol/L的氫氧化鉀-甲醇溶液混合均勻進行皂化反應，水浴皂化反應45min后取出放冷，過微孔濾膜后即得供試品溶液；

其中，步驟(3)所述的HPLC條件為：DikMA Platisil ODS C₁₈色譜柱，規格為250mm×4.6mm,5μm，流動相使用甲醇-水系統，檢測波長208nm，柱溫：30℃，進樣量20μl，梯度洗脫如下所示：

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，發酵蟲草菌粉甾醇類指紋圖譜中，圖譜總長度為46min，確定了12個共有特征峰，鑒定了4個特征峰，分別為7號峰為胡蘿卜苷；10號峰為麥角甾醇；11號峰為豆甾醇；12號峰為β-谷甾醇，

以10號峰麥角甾醇峰為參照，其他色譜峰相對保留時間和相對峰面積如下：

1號峰，平均相對保留時間為0.3600，平均相對峰面積為2.8712；

2號峰，平均相對保留時間為0.4357，平均相對峰面積為7.3177；

3號峰，平均相對保留時間為0.4686，平均相對峰面積為0.1348；

4號峰，平均相對保留時間為0.5343，平均相對峰面積為0.0686；

5號峰，平均相對保留時間為0.5583，平均相對峰面積為0.568；

6號峰，平均相對保留時間為0.6794，平均相對峰面積為0.5721；

7號峰，平均相對保留時間為0.7336，平均相對峰面積為0.0902；

8號峰，平均相對保留時間為0.7709，平均相對峰面積為0.1264；

9號峰，平均相對保留時間為0.8887，平均相對峰面積為0.0959；

10號峰，平均相對保留時間為1，平均相對峰面積為1；

11號峰，平均相對保留時間為1.2698，平均相對峰面積為0.0558；

12號峰，平均相對保留時間為1.3857，平均相對峰面積為0.0458。