[發(fā)明專利]一種金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810234023.7
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108489976A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃昊文;譚芳;楊艷;謝瀟雪;楊秀梅
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南科技大學(xué)
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 湘潭市匯智專利事務(wù)所(普通合伙) 43108
• 代理人: 宋向紅

本發(fā)明公開了一種金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法。將準(zhǔn)備好的金納米棒溶液與11?巰基十一烷酸作用；再離心分散后加入1?乙基?(3?二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和N?羥基琥珀酰亞胺活化；將活化好的金納米棒溶液與谷胱甘肽還原法制備的金納米簇溶液作用，再離心分散；將上一步所得金納米棒金納米簇復(fù)合納米材料與前列腺癌DNA適配體相連接；在溶液中分別加入不同濃度的前列腺癌特異性抗原反應(yīng)；并均加入顯色劑和雙氧水顯色，將溶液體系環(huán)境調(diào)節(jié)至酸性，置于氙燈光照條件下反應(yīng)，PSA濃度的不同，顯色劑呈現(xiàn)的顏色也不一樣，根據(jù)顯色劑在波長650nm處的吸光度值與PSA濃度的關(guān)系，能計算得到待測樣品中PSA的含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)生物傳感以及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于局域表面等離子體共振的金納米棒金納米簇復(fù)合納米材料快速檢測試劑盒的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

前列腺癌特異性抗原(PSA)，正常人體水平是0.5-2ng/mL，早期患者為4-10ng/mL。前列腺癌過去在我國發(fā)生率較低，但隨著人口老齡化和生活方式的改變，我國前列腺癌的發(fā)病率急劇上升，已經(jīng)躍居男性惡性腫瘤的第6位，成為泌尿外科中發(fā)病率最高的腫瘤，在癌癥初期，腫瘤標(biāo)志物的血清濃度通常很低以至于很難檢測到。因此，PSA含量的靈敏度和準(zhǔn)確性檢測具有相當(dāng)重要的意義，急需構(gòu)建一種精確、靈敏的分析方法來輔助腫瘤的早期診斷、監(jiān)控病情的進展及臨床治療。

納米生物技術(shù)是用于研究生命現(xiàn)象的納米技術(shù)，是納米技術(shù)和生物技術(shù)的結(jié)合。實現(xiàn)對納米顆粒的尺寸大小、粒度分布、形狀、表面修飾的控制，以及它們光電性質(zhì)在化學(xué)中的應(yīng)用，是納米生物技術(shù)研究的關(guān)鍵。納米金粒子具有較好的生物兼容性，一般生物大分子如酶以及其它蛋白質(zhì)分子，固定在納米金粒子上后可保留較好的生物活性，同時，納米金具有特殊的氧化-還原能力，與普通金不同的強烈的表面等離子體共振光譜帶等獨特的光學(xué)特性。因此，在分子識別、生物分析化學(xué)中具有重要而廣泛的應(yīng)用價值。

金納米棒具有獨特的表面等離子體共振(SPR)特性，同時具有良好的穩(wěn)定性和低的生物毒性。顏色的可調(diào)以及在催化、信息存儲、生物醫(yī)學(xué)等方面的廣泛應(yīng)用引起了業(yè)界的關(guān)注。

我們的研究表明通過金納米棒局域表面等離子體共振(LSPR)誘導(dǎo)納米復(fù)合物模擬酶性質(zhì)能實現(xiàn)可視化快速檢測。在氙燈光照條件下，金納米棒表面自由電子與光子相互作用可產(chǎn)生沿金屬表面?zhèn)鞑サ碾娮邮杳懿ǎ?dāng)這些表面等離子體自由振蕩頻率與入射光頻率一致時，會產(chǎn)生共振，從而可以加快金納米棒復(fù)合納米材料光催化顯色?；诖耍覀兘⒁环N基于金納米棒局域表面等離子體共振誘導(dǎo)金納米棒金納米簇復(fù)合納米材料催化分解雙氧水來檢測腫瘤標(biāo)志物的新方法，既可利用顏色變化對待測物進行可視化半定量檢測，又可以通過吸光度的大小對待測物的準(zhǔn)確含量進行定量檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種現(xiàn)象明顯、操作簡便、靈敏度高、準(zhǔn)確有效的金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法。

本發(fā)明的金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：

(1)首先制備好金納米棒溶液，將金納米棒溶液在離心機上以10000rpm離心10分鐘，去除上清液，再用二次蒸餾水進行分散后備用；

(2)依據(jù)金納米棒上的金與巰基化合物可形成金硫化學(xué)鍵，將離心好的金納米棒溶液與11-巰基十一烷酸(MUA)作用12小時；

(3)將步驟(2)所得溶液在離心機上以6000rpm的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，去除上清液后，再用二次蒸餾水進行分散，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化15分鐘；

(4)將步驟(3)活化好的金納米棒溶液與谷胱甘肽還原法制備的金納米簇溶液作用30分鐘，再以6000rpm轉(zhuǎn)速離心15分鐘，然后用二次蒸餾水進行分散，即可得到金納米棒金納米簇復(fù)合納米材料；