[發(fā)明專利]一種金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法

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• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108489976A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃昊文;譚芳;楊艷;謝瀟雪;楊秀梅
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南科技大學(xué)
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 湘潭市匯智專利事務(wù)所(普通合伙) 43108
• 代理人: 宋向紅

1.一種金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)首先制備好金納米棒溶液，將金納米棒溶液在離心機(jī)上以10000rpm離心10分鐘，去除上清液，再用二次蒸餾水進(jìn)行分散后備用；

(2)依據(jù)金納米棒上的金與巰基化合物可形成金硫化學(xué)鍵，將離心好的金納米棒溶液與11-巰基十一烷酸(MUA)作用12小時；

(3)將步驟(2)所得溶液在離心機(jī)上以6000rpm的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，去除上清液后，再用二次蒸餾水進(jìn)行分散，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化15分鐘；

(4)將步驟(3)活化好的金納米棒溶液與谷胱甘肽還原法制備的金納米簇溶液作用30分鐘，再以6000rpm轉(zhuǎn)速離心15分鐘，然后用二次蒸餾水進(jìn)行分散，即可得到金納米棒金納米簇復(fù)合納米材料；

(5)將步驟(4)得到的金納米棒金納米簇復(fù)合納米材料通過金硫化學(xué)鍵與帶巰基的前列腺癌DNA適配體(PSA-aptamer)相連接；

(6)依據(jù)前列腺癌DNA適配體(PSA-aptamer)與前列腺癌特異性抗原(PSA)的特異性結(jié)合，在步驟(5)所得溶液中分別加入不同濃度的前列腺癌特異性抗原(PSA)，反應(yīng)20分鐘；

(7)在步驟(6)所得溶液中均分別加入顯色劑(TMB)和雙氧水(H₂O₂)顯色，并將溶液體系環(huán)境調(diào)節(jié)至酸性，置于氙燈光照條件下反應(yīng)，當(dāng)金納米棒表面自由電子與入射光波長一致時，可產(chǎn)生局域表面等離子體共振，從而加快顯色反應(yīng)，根據(jù)PSA濃度的不同，覆蓋金納米棒金納米簇復(fù)合納米材料表面金納米簇的面積不一樣，使得未被PSA覆蓋的金納米棒金納米簇復(fù)合納米材料表面的金納米簇催化分解雙氧水產(chǎn)生羥基自由基的量也會不一樣，羥基自由基可以氧化TMB，進(jìn)而使顯色劑呈現(xiàn)的顏色也不一樣，再根據(jù)顯色劑(TMB)在波長650nm處的吸光度值與PSA濃度的關(guān)系，能計算得到待測樣品中PSA的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(1)所述制備金納米棒溶液采用晶種法進(jìn)行制備。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：在步驟(2)加入MUA作用之后，滴加少量表面活性劑(CTAB)，再進(jìn)行步驟(3)的離心。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(4)中，修飾了具有過氧化物模擬酶活性的金納米棒金納米簇復(fù)合物，金納米棒與金納米簇的體積比為5：1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(7)中，加入顯色劑后將溶液體系環(huán)境pH調(diào)節(jié)至5。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述金納米棒金納米簇復(fù)合物快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：步驟(7)中，對前列腺癌特異性抗原(PSA)的檢測限值為1×10^-16g/mL。