[發(fā)明專利]一種含硒植物蛋白的提取方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810234022.2
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108546280A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田歡;魏昌華;鮑征宇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國地質(zhì)大學（武漢）
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/30;C07K1/36
• 代理公司: 武漢知產(chǎn)時代知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42238
• 代理人: 馮必發(fā);金慧君

本發(fā)明公開了一種含硒植物蛋白的提取方法，包括預(yù)處理遏藍菜；加入提取劑，振蕩，抽濾，取上清液，過水系濾膜，得到提取液，冷藏保存；調(diào)節(jié)pH，加入預(yù)冷的飽和鹽溶液，邊加邊攪拌，靜置，至粗蛋白沉淀析出；高速冷凍離心機中離心棄上清液，得到下層蛋白沉淀；再次加入提取劑復溶，并攪拌至完全溶解，得到純化的蛋白溶液；透析；若透析完全，將透析袋中的液體轉(zhuǎn)移出來，則得到含硒蛋白溶液；調(diào)節(jié)pH,加入預(yù)冷的飽和鹽溶液靜置，至含硒蛋白沉淀析出；高速冷凍離心機離心，即得到含硒植物蛋白。本發(fā)明基于遏藍菜提取植物蛋白，顯著提高了植物蛋白的提取率，以及植物性蛋白中的硒含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白的提取方法，尤其涉及一種含硒植物蛋白的提取方法。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)是人體和動物生活所必須的營養(yǎng)成分，包括植物性蛋白和動物性蛋白。硒為動物和人體必需的微量元素之一，在土壤-植物-人體系統(tǒng)中，它最初來自于土壤，經(jīng)過植物光合作用，最終主要以硒氨基酸和硒蛋白形式儲存于植物體內(nèi)，再通過食物鏈進入人體，因此含硒蛋白是人體補硒的重要的營養(yǎng)物質(zhì)。

目前植物性硒蛋白的提取技術(shù)很多，包括三氯乙酸-丙酮沉淀(TCA)法、E-TCA(提取液添加了EGTA)法、酚提法、堿提法、酸提法和水提法等。提取蛋白質(zhì)首先要將蛋白質(zhì)溶解出來，綜合內(nèi)外因素的影響，將細胞內(nèi)蛋白質(zhì)提取出來，再用沉淀方法(如鹽析、層析、超濾、等電點等)分離提取液中蛋白質(zhì)，即得粗蛋白產(chǎn)品。然而，對于含硒蛋白的提取技術(shù)研究卻不多，而且有關(guān)技術(shù)參數(shù)差異較大，眾說紛紜。有機溶劑法提取蛋白應(yīng)用較為廣泛，具有沉淀蛋白質(zhì)分辨力高、提取雜質(zhì)較少、提取效率高的優(yōu)點，但卻存在高濃度有機溶劑易使蛋白質(zhì)變性失活、提取出的蛋白無法溶解、有機試劑難去除和方法不可逆等缺點。水提法提取條件溫和，環(huán)境危害小，蛋白色澤正常，其活性變化不大，但對于不同的植物中蛋白的性質(zhì)，水提法的提取效率不同，局限性較大，是否適用于富硒植物含硒蛋白的提取，依然存在疑問。與傳統(tǒng)的水溶液提取法相比，酶法提取和反應(yīng)條件溫和、選擇性高、蛋白質(zhì)提取純度較高、產(chǎn)品中有毒物質(zhì)含量低，但通過堿法與酶提取法對照實驗卻發(fā)現(xiàn)，采用兩種方法提取蛋白質(zhì)的提取率差異較大，堿法提取率要高于酶提法。堿提法具有工藝簡單、成本低、分離效率較高的優(yōu)點，但該方法受限于植物種類，使蛋白質(zhì)提取效率或高或低，并且提取時間長，提取溫度高，易使蛋白質(zhì)發(fā)生失活與變性。鹽溶法的應(yīng)用也較為廣泛，但在植物硒蛋白的提取方面效果欠佳，且鹽溶性蛋白硒含量也較低。綜上，如何從富硒植物中提取出更多的含硒蛋白，如何使提取蛋白中硒含量更高是當前含硒蛋白提取領(lǐng)域關(guān)注的核心問題。

遏藍菜是一種超聚硒植物，而且它能夠從土壤中有效的吸收并累積大量的硒元素，并以硒氨基酸形式保存在其蛋白組織中，因此遏藍菜是一種用于提取植物性含硒蛋白的天然綠色原料。然而有關(guān)含硒蛋白提取方面的專利技術(shù)極為欠缺，遏藍菜中水溶性蛋白含量高，且水溶性蛋白中硒含量也多，因此，研發(fā)出一種適合超聚硒植物遏藍菜含硒蛋白提取的方法是十分重要的。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的實施例提供了一種基于遏藍菜提取植物蛋白，且提取率高，提取蛋白的硒含量大的含硒植物蛋白的提取方法。

本發(fā)明的實施例提供一種含硒植物蛋白的提取方法，包括以下步驟：

S1.預(yù)處理遏藍菜，得到高聚硒的粉末樣品；

S2.向粉末樣品中加入5-15倍體積的提取劑，置于25℃恒溫水浴振蕩器中振蕩30-90min，振蕩速率為200r/min，混合均勻，抽濾，取上清液，過5μm水系濾膜，得到提取液，4℃冷藏保存；

S3.調(diào)節(jié)提取液的pH為3.5，并攪拌均勻，加入0.4-0.8倍提取液體積的預(yù)冷的飽和鹽溶液，邊加邊攪拌，4℃靜置，至粗蛋白沉淀析出；

S4.將析出粗蛋白沉淀的提取液置于高速冷凍離心機中離心10min，溫度為4℃，離心速率為10000r/min，棄上清液，得到下層蛋白沉淀；

S5.向下層蛋白沉淀中再次加入提取劑復溶，并攪拌至完全溶解，得到純化的蛋白溶液；