[發明專利]一種A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的高效制備方法

在審

• 申請號: 201810233904.7
• 申請日: 2018-03-19
• 公開（公告）號: CN108421036A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 馬偉;陳迅;馮超
• 申請（專利權）人: 浙江衛信生物藥業有限公司
• 主分類號: A61K39/095
• 分類號: A61K39/095;A61K39/385;A61K47/64;A61P31/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的高效制備方法，包括材料和制備工藝。本發明采用A群腦膜炎球菌莢膜多糖衍生物和白喉CRM197蛋白為原料，采用碳二亞胺EDAC作為交聯劑進行偶聯，通過衍生物溶液預備、混合配比、結合反應、時效處理、超濾、純化和除菌的工藝進行制備的技術方案，克服了現有技術存在效益低的問題與不足，通過提高多糖收率和蛋白收率，使A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的制備，達到了提高效益的目的。

技術領域

本發明涉及一種疫苗結合物的制備方法，具體是指用于制作A群腦膜炎球菌結合疫苗的結合物的一種A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的高效制備方法。

背景技術

名詞定義

腦膜炎球菌：腦膜炎球菌(meningococcus)的學名是腦膜炎奈瑟氏球菌(n.meninyitidis)，為流行性腦脊髓膜炎(流腦)的病原菌。現引起人體病變的菌株分型主要有A群、B群、C群、Y群及W135群。

腦膜炎球菌多糖疫苗：提取特定菌株腦膜炎球菌的細菌外莢膜多糖，經制劑成疫苗，用于預防該菌株腦膜炎球菌的侵襲感染。

腦膜炎球菌結合疫苗：提取特定菌株腦膜炎球菌的細菌外莢膜多糖，將莢膜多糖與特定的蛋白或多肽進行偶聯，制成結合物，再制劑成疫苗，用于預防該菌株腦膜炎球菌的侵襲感染。

莢膜多糖：細菌細胞壁外莢膜中的主要成分，可以是同多糖或異多糖，簡稱多糖。

多糖衍生物：將莢膜多糖經過化學手段修飾，形成易于蛋白或多肽進行偶聯的一種中間物；

載體蛋白：能夠與莢膜多糖進行偶聯的蛋白質，如破傷風類毒素(TT)，白喉類毒素(DT)，白喉減毒毒素(白喉CRM197蛋白)，B群外膜蛋白，以及其他可起到載體蛋白效應的氨基酸片段。

結合物：多糖衍生物與載體蛋白通過化學共價鍵進行偶聯獲得的一種偶聯物。

多糖回收率為在結合物中，多糖的含量與在制備結合物時投入的多糖衍生物總量之比，簡稱多糖收率；

載體蛋白回收率為在結合物中，載體蛋白的含量與在制備結合物時投入的載體蛋白總量之比，簡稱蛋白收率；

所述多糖收率和蛋白收率是評估結合物制備工藝效益的重要指標，多糖收率和蛋白收率越高，則結合物制備工藝的效益越高。

現有技術采用多糖衍生物在交聯劑介導下與載體蛋白進行偶聯形成穩定的結合物；由于各廠家采用的多糖衍生物、載體蛋白、交聯劑和制備工藝各不相同，所制備的結合物的多糖收率和蛋白收率亦不同，現有技術的多糖收率和蛋白收率分別為10％和12％左右，收率低，成本高，效益低，因此，現有技術存在多糖收率和蛋白收率低的問題與不足。

發明內容

針對上述現有技術存在的問題與不足，本發明采用A群腦膜炎球菌莢膜多糖衍生物和白喉CRM197蛋白為原料，采用碳二亞胺EDAC作為交聯劑進行偶聯，通過衍生物溶液預備、混合配比、結合反應、時效處理、超濾、純化、除菌的工藝進行制備的技術方案，提供一種A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的高效制備方法，旨在通過提高多糖收率和蛋白收率，使A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的制備，達到提高效益的目的。

本發明的目的是這樣實現的：一種A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的高效制備方法，包括材料和制備工藝，其中：

所述的材料為：

衍生物，A群腦膜炎球菌莢膜多糖衍生物；

載體蛋白，白喉CRM197蛋白，簡稱蛋白；

交聯劑，碳二亞胺EDAC；

氯化鈉，分析純；

鹽酸，分析純；

蒸餾水，分析純；