[發明專利]一種A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的高效制備方法

在審

• 申請號: 201810233904.7
• 申請日: 2018-03-19
• 公開（公告）號: CN108421036A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 馬偉;陳迅;馮超
• 申請（專利權）人: 浙江衛信生物藥業有限公司
• 主分類號: A61K39/095
• 分類號: A61K39/095;A61K39/385;A61K47/64;A61P31/04
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• 代理人: 暫無信息

1.一種A群腦膜炎球菌莢膜多糖結合物的高效制備方法，包括材料和制備工藝，其特征在于：

所述的材料為：

衍生物，A群腦膜炎球菌莢膜多糖衍生物；

載體蛋白，白喉CRM197蛋白，簡稱蛋白；

交聯劑，碳二亞胺EDAC；

氯化鈉，分析純；

鹽酸，分析純；

蒸餾水，分析純；

所述的制備工藝為：衍生物溶液預備、混合配比、結合反應、時效處理、超濾、純化、除菌；

步驟一、衍生物溶液預備

將所述衍生物放入燒杯中，采用水浴進行溫控，溫度控制在2～10℃范圍內，攪拌調節pH值，使用0.2mol/l的氯化鈉溶液和0.1mol/l的鹽酸溶液調節衍生物溶液的pH值至6.00±0.50范圍內；獲得衍生物溶液；

所述0.2mol/l的氯化鈉溶液由所述氯化鈉與所述蒸餾水調配而成；

所述0.1mol/l的鹽酸溶液由所述鹽酸與所述蒸餾水調配而成；

步驟二、混合配比

溫度控制在2～10℃的條件下，向燒杯內所述衍生物溶液中加入所述載體蛋白，攪拌混合，致燒杯中內容物的多糖與蛋白的比例達到1∶0.8～1∶2.5之間，多糖反應濃度在0.5～5mg/ml之間，獲得平衡溶液；

步驟三、結合反應

溫度控制在2～10℃的條件下，向燒杯內所述平衡溶液中加入所述交聯劑，攪拌混合，致燒杯內容物中的交聯劑的濃度達到10～100mmol/l，開始結合反應：

反應溫度保持在2～10℃，反應用時2～4小時，獲得初反應物；

步驟四、時效處理

將燒杯連同所述初反應物置于2～8℃的冰箱中，靜置18小時進行時效處理，獲得時效反應物；

步驟五、超濾

將所述時效反應物，用超濾機和100kD的超濾膜包進行6次換液超濾，每次以所述時效反應物的5倍體積的所述蒸餾水進行稀釋，除去結合反應過程中多余的殘留試劑，之后，獲得結合物濃縮液；

步驟六、純化

用AKTApure 150M蛋白純化儀對所述結合物濃縮液進行柱層析純化，純化填料為Sepharose 4 Fast Flow，純化線性流速為30-50cm/h，上樣純化體積不超過裝柱體積的5％，收集V0附近kD≤0.2的A280吸收峰處的物質，獲得結合物純化液；

步驟七、除菌：

用0.22μm濾膜對所述結合物純化液進行除菌過濾，獲得A群腦膜炎球菌結合物制品。