[發(fā)明專利]一種條件性neuritin knockin小鼠模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810230101.6
• 申請(qǐng)日: 2018-03-20
• 公開（公告）號(hào): CN109321595B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊磊;黃瑾;孫筱品;汪海燕;宋曉明;桂飛;洪玉;楊怡;諶容;朱井玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/90;C12N15/12;A01K67/027
• 代理公司: 北京國(guó)昊天誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11315
• 代理人: 南霆

本發(fā)明公開了一種條件性的neuritin knockin小鼠模型及其構(gòu)建的方法。利用基因打靶技術(shù)，將外源構(gòu)建的條件性基因打靶載體，定點(diǎn)整合入胚胎干細(xì)胞基因組上，從而構(gòu)建出neuritin基因打靶小鼠。條件性neuritin knockin小鼠模型在研究與人類疾病相關(guān)neuritin基因的功能的應(yīng)用。本發(fā)明的條件性neuritin knockin小鼠模型，可以和任何帶有組織特異性啟動(dòng)子的cre鼠雜交，在沒有外源給予tamoxifen的情況下neuritin是不表達(dá)的，只有在外源性給予tamoxifen的情況下neuritin才會(huì)過表達(dá)，可實(shí)現(xiàn)個(gè)體特定的組織和特定的時(shí)間選擇性的調(diào)控neuritin基因的功能，可以更加透徹的在生物體內(nèi)研究該基因的功能。當(dāng)然，實(shí)施本申請(qǐng)的任一產(chǎn)品必不一定需要同時(shí)達(dá)到以上所述的所有技術(shù)效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)屬于生物工程領(lǐng)域，更確切地說是提供條件性neuritin knockin小鼠模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

Neuritin，也稱作可塑性相關(guān)候選基因15(CPG15，candidate plasticity-related gene 15)，是一種與神經(jīng)可塑性密切相關(guān)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。已有研究表明Neuritin可抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，維持神經(jīng)元的存活，保護(hù)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元；促進(jìn)神經(jīng)突起的生長(zhǎng)及其分支，調(diào)節(jié)突觸回路的形成，介導(dǎo)突觸可塑性，因此在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育及損傷修復(fù)中發(fā)揮了重要作用。

近年研究顯示，過表達(dá)的Neuritin與神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)具有協(xié)同作用，體外實(shí)驗(yàn)表明神經(jīng)生長(zhǎng)因子驅(qū)使PC12細(xì)胞分化為類神經(jīng)元細(xì)胞，使其長(zhǎng)出更長(zhǎng)的突起，關(guān)于Neuritin的功能國(guó)內(nèi)外的研究均表明Neuritin能夠促進(jìn)PC12細(xì)胞、雞胚背根神經(jīng)節(jié)和神經(jīng)元的突起生長(zhǎng)和存活，并減少骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和神經(jīng)祖細(xì)胞的凋亡。此外，大鼠脊髓損傷后、小鼠短暫性全腦缺血后、大鼠全腦短暫性缺血后，均出現(xiàn)相應(yīng)區(qū)域Neuritin的表達(dá)上調(diào)，且表達(dá)水平的變化趨勢(shì)與損傷后的功能恢復(fù)呈正相關(guān)，提示了Neuritin與中樞神經(jīng)損傷后的功能修復(fù)密切相關(guān)，若是改變小鼠體內(nèi)Neuritin的表達(dá)量，可能會(huì)對(duì)組織結(jié)構(gòu)及功能有所影響。

遺憾的是目前在神經(jīng)系統(tǒng)受損后neuritin發(fā)揮的功能有些受限，通過體外細(xì)胞培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)的功能也很少在體內(nèi)得到進(jìn)一步的證實(shí)，也并不知曉Neuritin在耳蝸組織中的表達(dá)具有何種生物學(xué)功能。

為了進(jìn)一步在體內(nèi)研究neuritin基因的功能，并基于重組人神經(jīng)突起生長(zhǎng)因子在神經(jīng)損傷中的重要修復(fù)作用及轉(zhuǎn)基因小鼠的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，構(gòu)建一個(gè)在耳蝸組織特異性過表達(dá)neuritin基因小鼠的動(dòng)物模型，可以更好的從整體動(dòng)物水平評(píng)價(jià)Neuritin基因的系統(tǒng)生物學(xué)功能，以便研究神經(jīng)退行性疾病中Neuritin基因發(fā)揮作用的機(jī)制。

然而截至目前，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)也未見有條件性neuritin knockin小鼠模型的報(bào)道。為了針對(duì)現(xiàn)有缺乏條件性neuritin knockin小鼠的不足，而提供一種可以和任何帶有基因特異性啟動(dòng)子的cre鼠雜交的條件性neuritin knockin小鼠模型及其構(gòu)建方法，為研究與人類相關(guān)疾病提供模型及奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

因此，為了更好的從整體動(dòng)物水平評(píng)價(jià)Neuritin基因的系統(tǒng)生物學(xué)功能，運(yùn)用cre/loxp系統(tǒng)，通過位點(diǎn)特異性重組迅速而有效的實(shí)現(xiàn)neuritin基因的定點(diǎn)插入，從而建立條件性Neuritin knockin小鼠模型，可將該目的基因敲入小鼠與帶有組織特異性啟動(dòng)子的Cre鼠雜交，而帶有組織特異性的啟動(dòng)子的Cre鼠的選擇是構(gòu)建組織特異性過表達(dá)Neuritin基因小鼠模型的關(guān)鍵，只要選擇合適的啟動(dòng)子，通過Cre/Loxp位點(diǎn)依賴的特異性重組，可調(diào)控Cre重組酶的表達(dá)，使Neuritin基因只會(huì)在表達(dá)組織特異性啟動(dòng)子的細(xì)胞內(nèi)發(fā)生表達(dá)，可實(shí)現(xiàn)個(gè)體特定的組織和特定的時(shí)間選擇性的調(diào)控Neuritin基因的功能，從而更加透徹的在生物體內(nèi)研究該基因的功能。