[發明專利]衢枳殼HPLC指紋圖譜的建立方法、標準指紋圖譜及應用

在審

• 申請號: 201810229362.6
• 申請日: 2018-03-20
• 公開（公告）號: CN108445124A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 張文婷;岳超;黃琴偉;趙維良;宋劍鋒;郭增喜;馮超
• 申請（專利權）人: 浙江省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/86
• 分類號: G01N30/86;G01N30/74;G01N30/06
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;朱思蘭

本發明提供了一種衢枳殼HPLC指紋圖譜的構建方法，及由此方法得到的標準指紋圖譜，以及在衢枳殼質量控制中的應用；用本發明方法建立的HPLC指紋圖譜，能有效地表征衢枳殼藥材的質量，有利于全面監控藥材的質量；本發明綜合運用了指紋圖譜的共有峰比較、聚類分析和特有峰分析等方法對衢枳殼及其混淆品進行鑒別，實現對衢枳殼藥材及其常見混淆品的鑒別，并能對常用混淆品進行歸類，為衢枳殼藥材的質量控制、臨床正確使用提供依據；本發明具有方法簡便、穩定、精密度高、重現性好等優點，可快速、準確地鑒別產品的真偽優劣。

(一)技術領域

本發明涉及中藥藥材的質量控制方法，具體涉及衢枳殼藥材HPLC(高效液相色譜法)指紋圖譜的構建方法，由此方法得到的標準指紋圖譜，以及在衢枳殼質量控制中的應用。

(二)背景技術

“衢枳殼”又稱胡柚片，為蕓香科柑橘屬植物。1991年張韻冰先生依據其植物學特性將其正式命名，植物學拉丁名為Citrus changshan-huyou Y.B.Chang，使之成為中國柑桔屬植物的一個新種，浙江衢州地區為主要產區。七月果皮尚綠的胡柚青果被作為枳殼在民間使用由來已久，通過以往對胡柚的化學成分和藥理藥效的研究并與《中國藥典》中“枳殼”進行比較，發現兩者藥理作用基本一致。2015版《浙江省中藥炮制規范》將常山胡柚青果收錄其中，正式命名為“衢枳殼”。

以往對胡柚研究和新資源利用報道大多集中在成熟胡柚果實及胡柚皮、胡柚花等食品和保健品的開發利用上，對胡柚青果化學成分及其藥用價值的研究較少，對其質量評價的研究更少之又少。綜上，本發明選擇產地明確的衢枳殼為主要研究對象，通過液相色譜技術建立衢枳殼的指紋圖譜，通過相似度比較及聚類分析，從整體性角度出發，綜合評價衢枳殼的藥材質量，為衢枳殼的質量控制提供科學依據。

(三)發明內容

本發明旨在提供一種衢枳殼藥材HPLC指紋圖譜的構建方法，由此方法得到的標準指紋圖譜，以及在衢枳殼質量控制中的應用。

本發明的技術方案如下：

一種衢枳殼HPLC指紋圖譜的構建方法，所述方法包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備

稱取衢枳殼供試品，按料液比1：50～100(優選1：75，w/v，g/mL)加入體積分數50％甲醇水溶液中，超聲(30～70KHz，功率200～500w)處理10～30min，冷卻至室溫(20～30℃)，離心(10000～20000rpm)，取上清液，過濾，所得濾液即為供試品溶液；

所述衢枳殼供試品為衢枳殼藥材或衢枳殼飲片粉末，均可在市面上通過常規途徑商購獲得；

所述過濾采用0.45μm的尼龍微孔濾膜；

(2)色譜分析

精密吸取步驟(1)所得供試品溶液，注入高效液相色譜儀，檢測得到供試品的指紋圖譜；

所述色譜分析條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相由乙腈和體積分數0.1％～0.3％甲酸水溶液組成，采用梯度洗脫，紫外檢測波長為330～360nm；

優選的，所述色譜分析條件為：

色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相由乙腈和體積分數0.1％～0.3％甲酸水溶液組成，采用梯度洗脫，柱溫25～40℃，紫外檢測波長320～350nm，流速1.0ml/min，分析時間60～70min，進樣量5～10μL；

更加優選的，所述色譜分析條件為：

色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相由乙腈和體積分數0.1％甲酸水溶液組成，采用梯度洗脫，洗脫程序如表1所示，柱溫30℃，紫外檢測波長330nm，流速1.0ml/min，分析時間70min，進樣量5～10μL；

表1