[發明專利]一種人Y染色體微缺失檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201810228415.2
• 申請日: 2018-03-20
• 公開（公告）號: CN108148896A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 彭超敏;金云舟;周巍
• 申請（專利權）人: 上海五色石醫學研究股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6883
• 代理公司: 上海智晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 31313
• 代理人: 蔡繼清

本發明提供了一種人Y染色體微缺失的多重PCR擴增系統和檢測試劑盒，所述系統包含以下位點相應序列為SEQ ID No.1至SEQ ID No.40的擴增引物，15個Y染色體微缺失位點(AZFa區4個，AZFb區4個，AZFc區5個，AZFd區2個)、3個樣本分子標簽位點(X?STR2個，常染色體In/del位點1個)以及2個性別質控位點(SRY，ZFX/Y)，15個Y染色體微缺失位點采用序列標簽位點(STS)特異性引物，3個分子標簽位點采用長度多態性引物，2個性別質控位點采用STS特異性引物(EAA/EMQN關于Y染色體微缺失實驗室最佳指南推薦檢測位點，2013)，本發明所提供的這些引物相互兼容能夠在同一PCR擴增體系內進行反應；此外本發明還提供了包含含有擴增引物組合物容器、PCR反應母液容器、PCR輔助液容器的檢測試劑盒及其在人Y染色體微缺失非診斷檢測中的應用；本發明在DNA提取情況后，通過一個PCR反應對20個遺傳標記位點目的片段同時擴增，可顯著節省成本、人力和時間，提高工作效率。

技術領域

本發明屬于人核酸體外檢測技術領域，具體涉及人Y染色體微缺失多重PCR擴增系統和檢測試劑盒。

背景技術

據世界衛生組織(WHO)統計，全球約有10-15％的夫婦患有不育癥，而男性不育占一半。在男性不育中，半數以上屬原因不明者，在這些病人中，約15％表現為無精子癥、少精子癥。除了輸精管梗阻、內分泌異常、性功能障礙、先天性疾病、感染等病因外，相當一部分患者病因一直不明確。自1976年Tiepolo和Zuffardi發現無精子患者存在Yq11遠端缺失以來，越來越多的報道支持Yq11遠端存在精子發生調控基因，它們的缺失或突變可引起精子發生的異常。Y染色體上存在著精子發生調控基因即無精子癥因子(Azoospermia Factor，AZF)，其缺失引起的生精障礙是導致男性不育的重要原因，表現為原發性無精子癥(Azoospermia)或少精癥(Oligospermia)。現在研究表明，在精子發生障礙引起的男性不育患者中，繼克氏綜合癥之后，Y染色體微缺失被認為是導致男性不育的第二遺傳因素。

Y染色體男性-特異區(MSY，male-specific region of the Y chromosome)占整個Y染色體的95％，由擬常染色體區域構成其側翼序列，基因微缺失的影響，MSY一般分為AZFa、AZFb、AZFc三個獨立的亞區；有學者建議將AZFb與AZFc之間且最接近AZFc區列為AZFd區。在不育男性中，雖然由于病人選擇標準的差異微缺失發生頻率的變動范圍較大。但相對來說，其發生頻率在不育男性中較為常見，與寡精子癥男性相比，無精子癥男性擁有更高的微缺失發生率。不同實驗室報告的缺失頻率變動范圍較大，從2％-10％(甚至更高)，這反映了缺失頻率受研究人群組成差異的直接影響。AZF各亞區的缺失頻率不同，基于Munster生殖醫學研究所34個Y染色體微缺失病人的研究結果，AZFc亞區的缺失頻率最高，占總缺失的79％；其次是AZFb，占9％；AZFbc占6％；AZFa的缺失頻率最低，占3％，另外AZFabc(XX男性：占3％)。

鑒于Y染色體微缺失在男性不育中的重要性以及不同的微缺失對男性不育后續治療的重要指導價值，在2004年版歐洲男科協會(EAA)和歐洲分子遺傳實驗質控網(EMQN)關于Y染色體微缺失分子診斷最佳實踐指南中，已將Y染色體微缺失檢測推薦作為男性少精、無精癥患者的常規檢測項目以及輔助生殖前的必檢項目。