[發明專利]一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法

在審

• 申請號: 201810228144.0
• 申請日: 2018-03-20
• 公開（公告）號: CN108410946A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 李增平;張宇;丁婧鈺;吳如慧
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 趙蕊紅

本發明公開了一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法，包括步驟：(1)制作含有木屑82％、麥麩15％、葡萄糖2％和石膏1％的木屑培養基；(2)在木屑培養基上引入菌株，制作接種菌棒；(3)選擇幼樹，消毒后在近地面10?30cm處的莖干上削出一個長1?5cm、深1?5mm的切口為接種部位，與接種菌棒的一側剪口匹配，接種部位下端附上濕棉花保濕，用塑料條包裹固定，再在距離接種部位上方約5?10cm處圍繞莖干將厚紙包裹呈傘形以遮蓋住接種菌棒；(4)接種侵染1?2個月，解開包裹接種體的厚紙及塑料條，進行致病性驗證。采用本發明提供的方法，首次在活立木幼樹莖干上進行接種，實現引起樹木莖腐病和根腐病的病原木腐菌的致病性測定，成功率高且操作簡易。

技術領域

本發明涉及植物保護領域，尤其涉及一種利用活立木莖干接種擔子菌中病原木腐菌的方法及其致病性驗證應用。

背景技術

木腐菌(Wood-decaying fungi)能夠降解腐木和倒木，絕大多數為擔子菌門真菌，其中有些種類能夠侵染樹林活立木的莖干或根系，引起樹木的莖腐病或根腐病，影響樹木長勢，嚴重時整株死亡，是重要的病原木腐菌。由病原木腐菌引起的樹木莖腐病或根腐病，在完成柯赫法則驗證其致病性過程中，致病性測定是一大難題。目前大部分都利用離體材料人工接種來完成木腐菌所致樹木莖腐或根腐病病菌致病性的測定，如專利CN201610276468公開了一種離體莖測定煙草疫霉致病性的方法，專利CN201610276471公開了一種南瓜片測定煙草疫霉致病性的方法，專利CN201710132452公開了一種測定甘蔗梢腐病病菌致病性的方法，以上均為離體接種方法，實驗環境易控制，但與病害實際的致病性驗證存在一定差異，而且所報道的病原菌歸屬于卵菌和半知菌類，而利用活立木的莖干進行人工接種驗證擔子菌中的病原木腐菌的致病性未見報道。另外也有部分研究利用根塊接種進行根腐病病菌致病性的測定，挖根費時費力且成功率低。

本發明人經過十多年的研究和反復驗證，成功摸索出一種利用活樹莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的接種方法，并應用于危害樹木莖干或根系的病原木腐菌的致病性驗證。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法，解決了現有接種方法離體操作麻煩、成功率低的問題。

本發明采用的技術手段如下：一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法，包括以下步驟：

(1)制作木屑培養基

按重量百分比將木屑82％、麥麩15％、葡萄糖2％和石膏1％配好，加水潤濕后混勻并分裝到直徑3-6cm、高5-10cm的小塑料袋中，封口，在121℃下濕熱滅菌1-2h；

(2)制作接種菌棒

從培養的病原木腐菌菌落上挑取菌絲塊，接種到步驟(1)的木屑培養基中，置于26℃-28℃下培養10-40天制作接種體，待接種體內的菌絲長滿菌袋后作為接種菌棒備用；

(3)接種

在適宜病菌侵染的季節，選擇生長2-3年生的健康幼樹，先對幼樹地上30cm內的莖干消毒，后在近地面10-30cm處的莖干上削出一個長1-5cm、深1-5mm的平面切口為接種部位，同時在接種菌棒的一側剪開一個與莖干傷口相匹配的剪口，將接種菌棒緊貼在莖干傷口上，接種部位下端附上濕棉花保濕，用3-5cm寬的塑料條包裹固定，再在距離接種部位上方約5-10cm處，圍繞莖干用膠帶將厚紙包裹呈傘形遮蓋住接種菌棒；

(4)致病性驗證

接種侵染1-2個月，解開包裹接種體的厚紙及塑料條，若接種菌棒牢固地附著在幼樹莖干上，菌棒顏色無變化，接種菌棒附近的莖干上均長滿菌絲和菌膜，在】莖干傷口處削去表皮組織，可見內部組織變色并發生白腐，說明接種成功；繼續觀察幼樹是否出現病原木腐菌的發病癥狀，從而驗證病原木腐菌的致病性。