[發明專利]一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法

在審

• 申請號: 201810228144.0
• 申請日: 2018-03-20
• 公開（公告）號: CN108410946A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 李增平;張宇;丁婧鈺;吳如慧
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 趙蕊紅

1.一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制作木屑培養基

按重量百分比將木屑82％、麥麩15％、葡萄糖2％和石膏1％配好，加水潤濕后混勻并分裝到直徑3-6cm、高5-10cm的小塑料袋中，封口，在121℃下濕熱滅菌1-2h；

(2)制作接種菌棒

從培養的病原木腐菌菌落上挑取菌絲塊，接種到步驟(1)的木屑培養基中，置于26℃-28℃下培養10-40天制作接種體，待接種體內的菌絲長滿菌袋后作為接種菌棒備用；

(3)接種

在適宜病菌侵染的季節，選擇生長2-3年生以上的健康幼樹，先對幼樹地上30cm內的莖干消毒，然后在近地面10-30cm處的莖干上削出一個長1-5cm、深1-5mm的切口作為接種部位，同時在接種菌棒的一側剪出與莖干傷口相匹配的剪口，將接種菌棒的剪口處緊貼在莖干傷口上，接種部位下端附上濕棉花保濕，用3-5cm寬的塑料條包裹固定，再在距離接種部位上方約5-10cm處圍繞莖干將厚紙包裹呈傘形以遮蓋住接種菌棒；

(4)致病性驗證

接種侵染1-2個月，解開包裹接種體的厚紙及塑料條，若接種菌棒牢固地附著在幼樹莖干上，菌棒顏色無變化，在接種菌棒處的莖干上下方均長出菌絲和菌膜，且將莖干接種傷口處的表皮組織削去，可見內部組織變色并發生白腐，說明接種成功；繼續觀察幼樹是否出現與田間自然發病的病樹相同的發病癥狀，從而驗證病原木腐菌的致病性。

2.根據權利要求1所述的一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的接種時間選為5-9月。

3.根據權利要求1所述的一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，采用70％的酒精對莖干表面進行消毒。

4.根據權利要求1-3所述的一種利用活立木莖干測定擔子菌中病原木腐菌致病性的方法，其特征在于：每株幼樹接種1-3個菌棒。