[發明專利]一種提高L-羥脯胺酸產酸菌種的基因突變及菌種選育方法在審
| 申請號： | 201810227122.2 | 申請日： | 2018-03-20 |
| 公開（公告）號： | CN108330124A | 公開（公告）日： | 2018-07-27 |
| 發明（設計）人： | 陳亮;俞洋;孫寧 | 申請（專利權）人： | 安徽鼎欣醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N13/00 | 分類號： | C12N13/00;C12P13/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240 | 代理人： | 王桂名 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市蜀山區新產*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 培養基 微型玻璃 反應器 菌種 基因突變 菌種選育 乙酸鈉 產酸 羥脯 氯化鈉 葡萄糖 酵母抽提物 瓊脂培養基 往復式搖床 保藏 磁力攪拌 分批培養 連續培養 水浴搖床 種子培養 轉接 蛋白胨 接種量 蠕動泵 突變株 錐形瓶 甘油 試管 殘糖 定容 混勻 取樣 誘變 裝液 通氣 篩選 | ||
1.一種提高L-羥脯胺酸產酸菌種的基因突變及菌種選育方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)、YPS培養基：稱取蛋白胨5g，酵母抽提物2.5g；
M培養基：稱取氯化鈉5g，混勻定容至0.5L，調pH值7.0～7.1；
瓊脂培養基中加入不同濃度的乙酸鈉；
2)、種子培養：取25ul甘油保藏菌種，接入裝在15ml試管的5mlYPS培養基中，37℃、200rpm/min水浴搖床培養過夜，轉接0.5ml于250ml錐形瓶，該250ml錐形瓶裝50mlYPS培養基，在33℃，200rpm/min往復式搖床培養4小時；
3)、分批培養：采用500ml磁力攪拌的微型玻璃反應器，裝液300ml，在37℃下接種量2.5ml，通氣1.5vvm；
4)、連續培養：微型玻璃反應器裝液250ml，在37℃下接種量2.5ml，通氣1.5vvm，蠕動泵控制進出微型玻璃反應器的培養基流速，每隔4小時取樣測定殘糖及pH，連續三次基本不變動時，達到穩定；
5)、誘變：培養過夜的大腸桿菌菌液5ml，3000rpm/min高速離心10min，加無菌生理鹽水，離心洗滌2次，均勻重懸，以不同劑量進行紫外輻射處理；
6)、經過篩選得到3株突變株，在含10g/l葡萄糖和10g/l乙酸鈉的MA培養基中培養24小時。
2.根據權利要求1所述的一種提高L-羥脯胺酸產酸菌種的基因突變及菌種選育方法，其特征在于：步驟1)中
YPS培養基：稱取蛋白胨5g，酵母抽提物2.5g；
M培養基：稱取氯化鈉5g，混勻定容至0.5L，調pH值7.0；
瓊脂培養基中加入不同濃度的乙酸鈉。
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