[發明專利]一種堆積型的嵌合抗原受體及其制備方法

有效

• 申請號: 201810225584.0
• 申請日: 2018-03-19
• 公開（公告）號: CN108424463B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 應述歡;李玉霞;高鵬;謝國明
• 申請（專利權）人: 勝武（北京）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 南京艾普利德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32297
• 代理人: 張鉑

本發明公開了一種堆積型嵌合抗原受體及其制備方法。通過“點擊化學”為基礎的堆積式的組合方法形成嵌合抗原受體修飾的T細胞，簡稱為4C?T(Click Chemistry?based Cordwood Chimeric antigen receptor T?Cell)。本發明所述的點擊化學為基礎的堆積型CAR?T保持了CAR?T的靶向性和殺傷性，又進一步減小了不同產品間的生物技術路線方面的差異，提高了生物制品的同質性，從而提高了CAR?T制品的均一性和質量標準，還進一步提高了CAR?T的個性化，為CAR?T提高臨床治療癌癥的安全性提供了重要途徑。

技術領域

本發明涉及生物醫學轉化領域，尤其涉及一種堆積型的嵌合抗原受體及其制備方法。

技術背景

嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)修飾T細胞是近年來迅速發展的腫瘤過繼免疫治療新手段，其獨特的作用機制和誘人的應用前景為腫瘤生物治療開辟了一個嶄新的舞臺。CAR將識別腫瘤相關抗原的單鏈抗體和T細胞的活化基序相結合，通過基因轉導賦予T細胞腫瘤靶向性、更強的殺傷活性和持久的生命力。自1989年Eshhar等首次提出CAR以來，CAR技術臨床上在血液系統腫瘤甚至實體瘤的治療上取得了顯著成績，目前已經發展到第三代。第一代CAR由單鏈抗體通過跨膜區域與胞內信號傳導區(ITAM)相連，ITAM通常為CD3ζ或FcεRIγ；第二代CAR的胞內信號傳導區引入了共刺激分子(costimulatorymolecule，CM)，主要為CD28分子；第三代CAR引入了雙共刺激分子(CM1和CM2)，主要為CD28分子加上CD134或CD137等。第一代CAR-T淋巴細胞研究較多，但是大多數試驗在細胞擴增、體外存活時間、細胞因子分泌等方面還存在不足，沒有達到預期的臨床效果。研究表明，T淋巴細胞的完全活化有賴于雙信號和細胞因子的作用。其中第一信號為特異性信號，由TCR識別抗原遞呈細胞表面的抗原肽-MHC復合物所啟動；第二信號為協同刺激信號，通過CD28/B7等重要的共刺激分子，促進IL-2合成，并使T淋巴細胞充分活化及免于凋亡。即使T淋巴細胞與抗原接觸，如果沒有協同刺激信號，細胞難以發揮正常功能。相應的，僅含有CD3ζ序列的嵌合抗原受體，如果沒有協同刺激信號，也難以高效激活CAR-T淋巴細胞。因此，依照T淋巴細胞活化的雙信號學說，第二代和第三代CAR在嵌合抗原受體上加上如CD28、CD137等共刺激分子，以提高T淋巴細胞的細胞毒性、增殖活性，維持T淋巴細胞應答，延長T淋巴細胞存活時間等。研究證實第二代的CAR-T淋巴細胞在殺傷腫瘤活性和體內存活時間均優于第一代。目前，第三代CAR-T淋巴細胞臨床應用還比較少，故其安全性和有效性是否就一定優于第二代CAR-T淋巴細胞，以及選擇怎樣的共刺激分子組合，還需要進一步觀察。

雖然CAR-T靶向治療腫瘤細胞是目前最有前景的癌癥治療方案之一，但是，有效保持產品的質量和一致性是CAR-T產業化途徑中的重要方面。提高T細胞編輯的均質性，可以有效提高T細胞產品的一致性和質量控制，加快CAR-T的產業化進程。因此，將復雜的CAR-T細胞模塊化，將同質部分進行同質化處理，再通過后續的技術進行模塊堆積化的處理而形成產品差異化，對CAR-T在臨床的質控和推廣應用具有重要意義。

另一方面，多靶點的CAR-T能夠解決單靶點CAR-T靶向性差，結合力弱的缺點；還可以解決復發的腫瘤對CAR-T細胞產生了耐藥性。以往的串聯表達多個scFv的策略一方面受限于空間表位，多抗原結合力弱；并且，不同患者不同雙表位制備復雜，增加了質控難度。本發明在同質化的T細胞上堆積修飾不同的表位抗體，可以針對不同患者進行雙靶點甚至多靶點的個性化治療設計，并且有效回避耐藥性。

發明內容