[發明專利]一種基于免疫磁分離技術和生物發光技術的大腸桿菌的檢測方法在審
| 申請號： | 201810224936.0 | 申請日： | 2018-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN108507987A | 公開（公告）日： | 2018-09-07 |
| 發明（設計）人： | 王春興;張志杰;楊志政;韓旭;徐元達 | 申請（專利權）人： | 山東師范大學 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221 | 代理人： | 張曉鵬 |
| 地址： | 250014 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大腸桿菌 磁性納米探針 大腸桿菌抗體 捕獲 免疫磁分離 生物發光 生物素化 富集 檢測 磁性納米顆粒 大腸桿菌溶液 制備磁性納米 磁性分離架 鏈霉親和素 富集分離 離心管 清洗液 生物素 熒光素 熒光 裂解 偶聯 探針 修飾 沖洗 發光 清洗 | ||
1.一種基于免疫磁分離技術和生物發光技術的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：
1)將生物素與大腸桿菌抗體偶聯，得到生物素化的大腸桿菌抗體；
2)生物素化的大腸桿菌抗體和鏈霉親和素修飾的磁性納米顆?；旌希苽浯判约{米探針；
3)使用PBS緩沖液沖洗磁性納米探針后，將磁性納米探針加入到大腸桿菌溶液中，培養，使大腸桿菌被磁性納米探針捕獲；
4)捕獲大腸桿菌后的溶液置于離心管中，在離心管的一側放置磁性分離架，將捕獲有大腸桿菌的磁性納米探針進行富集；
5)采用清洗液對步驟4)中富集的樣品進行清洗，得到用于ATP發光的溶液，磁性納米探針被磁性分離架富集分離；
6)向步驟5)中得到的用于ATP發光的溶液中加入ATP擦除劑設定時間后，去除溶液中體細胞和游離ATP，再加入細菌裂解劑，對大腸桿菌進行裂解；
7)向步驟6)中裂解后的溶液中加入熒光素和Mg2+，通過檢測溶液的熒光強度，計算得到大腸桿菌的數量。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟1)中，生物素與大腸桿菌抗體的摩爾比為1:1。
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟2)中，磁性納米顆粒的粒徑為1-100nm。
4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于：磁性納米顆粒的粒徑為60-80nm。
5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟3)中，培養的時間為5-15min。
6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：步驟3)中，培養的時間為10min。
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟5)中，所述清洗液為10m mol/L的PBS緩沖液，PBS緩沖液中的Tween-20的質量分數為0.05％。
8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟7)中，加入的熒光素和Mg2+過量。
9.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟4)-步驟7)在暗室中進行。
10.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟7)中，采用光電倍增管收集反應釋放的熒光，其峰值波長范圍為500-600nm。
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