[發(fā)明專利]高效液相色譜法檢測EP9.0版螺旋霉素雜質(zhì)的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810224862.0 | 申請日： | 2018-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN109725102B | 公開（公告）日： | 2021-01-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王文;朱德育;張宏周;王聰;劉寧宇;王志濤;曹立成;任真;劉迎賓;李愛玲;楊思聰;苗德意 | 申請（專利權(quán)）人： | 天方藥業(yè)有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/88 | 分類號： | G01N30/88 |
| 代理公司： | 北京中譽威圣知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11279 | 代理人： | 席勇;張相午 |
| 地址： | 463000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 高效 色譜 檢測 ep9 螺旋 霉素 雜質(zhì) 方法 | ||
本發(fā)明公開了高效液相色譜法檢測EP9.0版螺旋霉素雜質(zhì)的方法，具體包括：采用高氯酸、氫氧化鈉溶液和磷酸制得緩沖溶液，然后將該緩沖溶液與乙腈混合制得流動相，采用辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱為填充柱，對含有EP9.0版螺旋霉素及其雜質(zhì)的樣品溶液進行檢測。該檢測過程中色譜柱的溫度為30℃，遠低于EP9.0版螺旋霉素高效液相檢驗方法要求的70℃，降低了色譜柱的損耗，單樣品檢測時間由80分鐘縮短至40分鐘，檢測時間減少；該方法能夠檢測螺旋霉素產(chǎn)品中雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)D、雜質(zhì)F的含量，可應(yīng)用在螺旋霉素生產(chǎn)過程的中間檢驗中，控制中間環(huán)節(jié)中的產(chǎn)品質(zhì)量。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及藥物分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及高效液相色譜法檢測EP9.0版螺旋霉素雜質(zhì)的方法。
背景技術(shù)
螺旋霉素(Spiramycin，簡稱SPM)是16元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，化學(xué)名是：(4R,5S,6S,7R,9R,10R,16R)-(11E,13E)-6-[(0-2,6-雙脫氧基-3-C-甲基-α-L-核黃素-已吡喃)-(1,4)-(3,6-雙脫氧基-3-二甲氨基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-7-甲酰基-4-羥基-5-甲氧基-9,16-二甲基-10-[(2,3,4,6-四氧基-4-二甲基氨基-D-紅-己吡喃)氧基]-含氧環(huán)十六酮-11,13-二烯基-2酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
具有較強的體內(nèi)抗菌作用和持續(xù)的抗生素后效，能提高吞噬細胞的吞噬作用，可用于治療革蘭氏陽性菌引起的感染。螺旋霉素在臨床應(yīng)用40余年后的今天，還有著廣泛的用途，對于感染性疾病治療仍具有臨床應(yīng)用和推廣價值，可用作動物飼料添加劑，在個別領(lǐng)域，也具有進一步拓展的空間。
目前螺旋霉素主要使用歐盟范圍，遵循歐盟質(zhì)量檢驗標(biāo)準(zhǔn)。在日常檢驗中使用EP9.0版歐洲藥典中關(guān)于螺旋霉素相關(guān)物質(zhì)檢測方法。該檢測方法的色譜條件是：色譜柱型號：長度＝0.25m，直徑＝4.6mm；固定相：液相色譜用十八烷基硅烷鍵合硅膠(5μm)(極性填充的十八烷基硅烷甲基鍵合硅膠)，孔徑12.5nm，碳填充物15％；柱溫：70℃；流動相：將事先用27.2g/l磷酸二氫鉀溶液調(diào)節(jié)pH值為6.5的34.8g/l磷酸氫二鉀溶液、乙腈和水混合(體積比：5：40：55)；流速：1.0ml/min；檢測波長：232nm。
該方法使用C18色譜柱，柱溫為70℃，柱溫遠高于一般產(chǎn)品的檢測溫度，對C18色譜柱損害較大，影響C18色譜柱的使用壽命；該方法中單樣品的走樣時間在60-80分鐘左右，檢驗時間較長，不利于螺旋霉素生產(chǎn)過程中間產(chǎn)品質(zhì)量的日常檢驗及監(jiān)控。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的螺旋霉素生產(chǎn)過程中的中間產(chǎn)品檢測中柱溫過高、檢測時間過長的問題，本發(fā)明提供了采用高效液相色譜法檢測EP9.0版螺旋霉素雜質(zhì)的方法。
本發(fā)明提供了一種采用高效液相色譜法檢測EP9.0版螺旋霉素雜質(zhì)的方法，步驟包括：采用高氯酸、氫氧化鈉溶液和磷酸制得緩沖溶液，然后將所述緩沖溶液與乙腈混合制得流動相；采用辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱即C8色譜柱為填充柱，對含有EP版螺旋霉素及其雜質(zhì)的樣品溶液進行檢測；
其中，所述雜質(zhì)結(jié)構(gòu)如下：
雜質(zhì)A為新螺旋霉素I(R1＝H，R2＝OH，R3＝CH2-CHO)，分子式：
(4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-雙脫氧基-3-二甲氨基-β-D-吡喃葡萄糖基]氧基]-4-羥基-5-甲氧基-9,16-二甲基-7-[2-氧乙基]-10-[[2,3,4,6-四氧基-4-二甲基氨基-β-D-紅-已吡喃]氧基]-含氧環(huán)十六酮-11,13-二烯基-2-酮；
雜質(zhì)B為螺旋霉素IV(R1＝H，R2＝osyl，R3＝CH2-CH2OH)，分子式：
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于天方藥業(yè)有限公司，未經(jīng)天方藥業(yè)有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810224862.0/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
