[發明專利]高效液相色譜法檢測EP9.0版螺旋霉素雜質的方法

有效

• 申請號: 201810224862.0
• 申請日: 2018-03-19
• 公開（公告）號: CN109725102B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 王文;朱德育;張宏周;王聰;劉寧宇;王志濤;曹立成;任真;劉迎賓;李愛玲;楊思聰;苗德意
• 申請（專利權）人: 天方藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 席勇;張相午

1.一種采用高效液相色譜法檢測EP9.0版螺旋霉素雜質的方法，其特征在于：采用高氯酸、氫氧化鈉溶液和磷酸制得緩沖溶液，然后將所述緩沖溶液與乙腈混合制得流動相；采用辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱為填充柱，對含有EP9.0版螺旋霉素及其雜質的樣品溶液進行檢測；

所述高氯酸的用量為9.0～10.0g；所述氫氧化鈉溶液的濃度為3％～5％，用量為40～65ml；磷酸溶液濃度為85％，用量為6～8ml；所述緩沖溶液的pH＝2～4，所述緩沖溶液與乙腈按體積比為4～8∶6～2；

所述辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱的柱溫為28～32℃；

其中，所述雜質結構如下：

雜質A為新螺旋霉素I R1＝H，R2＝OH，R3＝CH₂-CHO，分子式是：

(4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-雙脫氧基-3-二甲氨基-β-D-吡喃葡萄糖基]氧基]-4-羥基-5-甲氧基-9,16-二甲基-7-[2-氧乙基]-10-[[2,3,4,6-四氧基-4-二甲基氨基-β-D-紅-已吡喃]氧基]-含氧環十六酮-11,13-二烯基-2-酮；

雜質B為螺旋霉素IV R1＝H，R2＝osyl，R3＝CH₂-CH₂OH，分子式是：

(4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-雙脫氧基-4-O-(2,6-雙脫氧基-3-C-甲基-α-L-核黃素-已吡喃)-3-(二甲氨基)-β-D-吡喃葡萄糖基]氧基]-4-羥基-7-[2-羥乙基]-5-甲氧基-9,16-二甲基-10-[[2,3,4,6-四氧基-4-(二甲基氨基)-β-D-紅-已吡喃]氧基]-含氧環十六酮-11,13-二烯基-2-酮；

雜質D為螺旋霉素V的結構式是：

螺旋霉素V的分子式是：(4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-雙脫氧基-4-O-(2,6-雙脫氧基-3-C-甲基-α-L-核黃素-已吡喃)-3-二甲氨基-β-D-吡喃葡萄糖基]氧基]-10-[(2,6-雙脫氧基-3-C-甲基-α-L-核黃素-已吡喃)氧基]-4-羥基-5-甲氧基-9,16-二甲基-7-[2-氧乙基]-含氧環十六酮-11,13-二烯基-2-酮；

雜質F為螺旋霉素二聚體，結構式如下：

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述樣品溶液的配制過程包括：將乙腈和水按體積比為2～4∶8～6進行混合，配制成極性溶劑，采用該極性溶劑溶解螺旋霉素，配制成濃度為1～2mg/ml含螺旋霉素及其雜質的樣品溶液。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱為Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C8；所述辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱的尺寸為250mm柱長×4.6mm柱內徑。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述流動相的流速為0.8～1.3ml/min。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述檢測的檢測波長為220～240nm。