[發明專利]一種用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒及其制備方法

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• 申請號: 201810222368.0
• 申請日: 2018-03-16
• 公開（公告）號: CN108459167A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 王慧英
• 申請（專利權）人: 江蘇維爾生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/532
• 代理公司: 常州智慧騰達專利代理事務所(普通合伙) 32328
• 代理人: 曹軍

1.一種用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括海綿墊和與所述海綿墊連接的β-HCG試紙條及PDG試紙條，所述β-HCG試紙條或所述PDG試紙條分別包括依次連接排列的樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水紙。

2.如權利要求1所述的用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述β-HCG試紙條的金標墊由玻璃纖維浸泡β-HCG抗體金標結合物和兔IgG金標結合物干燥后制成，所述PDG試紙條的金標墊由玻璃纖維浸泡PDG單抗金標結合物和兔IgG金標結合物干燥后制成。

3.如權利要求1所述的用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述β-HCG試紙條的硝酸纖維素膜靠近所述金標墊的一端設置有由預包被的β-HCG抗體形成的檢測區，所述β-HCG試紙條的硝酸纖維素膜靠近所述吸水紙的一端設置有由預包被的羊抗兔IgG抗體形成的質控區。

4.如權利要求1所述的用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述PDG試紙條的硝酸纖維素膜靠近金標墊的一端設置有由預包被的PDG-BSA半抗原形成的檢測區，所述PDG試紙條的硝酸纖維素膜靠近所述吸水紙的一端設置有由預包被的羊抗兔IgG抗體形成的質控區。

5.如權利要求1所述的用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述主殼體包括上蓋和與上蓋相互卡合的下蓋，所述上蓋上開設有第一視窗和第二視窗。

6.如權利要求5所述的用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述上蓋的外表面上還凹設有顯示區，所述第一視窗和第二視窗并排開設于所述顯示區內。

7.一種用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒的制備方法，其包括以下步驟：

(1)制備膠體金：加熱超純水至沸騰，向沸水中加入10％氯金酸溶液，快速加入10％檸檬酸三鈉溶液，攪拌混勻，保持溶液沸騰，直到液體呈酒紅色即停止加熱，冷卻至室溫后補足失水；

(2)制備β-HCG抗體標記溶液：取一定體積的膠體金溶液，加入一定量的K₂CO₃調節PH，緩慢加入β-HCG抗體，繼續攪拌30分鐘后，加入10％BSA溶液封閉，離心，棄去上清液，沉淀用緩沖液懸浮，保存備用；

(3)制備PDG單抗標記溶液：取一定體積的膠體金溶液，加入一定量的K₂CO₃調節PH，緩慢加入PDG單抗，繼續攪拌，加入10％BSA溶液封閉，離心，棄去上清液，沉淀用緩沖液懸浮，保存備用；

(4)制備兔IgG標記溶液：取一定體積的膠體金溶液，加入K₂CO₃調節PH，緩慢加入兔IgG，繼續攪拌，加入10％BSA溶液封閉，離心，棄去上清液，沉淀用緩沖液懸浮，保存備用；

(5)將玻璃纖維膠分別浸泡在β-HCG抗體標記溶液、兔IgG標記溶液和PDG單抗標記溶液、兔IgG標記溶液中，干燥后作為金標墊備用；

(6)β-HCG抗體包被：在硝酸纖維素膜上分別包被β-HCG抗體形成檢測區，包被羊抗兔IgG形成控制區，干燥后備用；

(7)PDG-BSA半抗原包被：在硝酸纖維素膜上分別包被PDG-BSA半抗原形成檢測區，包被羊抗兔IgG抗體，干燥后備用。

8.如權利要求7所述的用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒的制備方法，其特征在于：還包括樣品墊處理步驟，樣品墊分別用樣品墊處理液浸泡處理，干燥后備用。

9.如權利要求7所述的用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒的制備方法，其特征在于：還包括以下步驟，將吸水紙、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊依次粘貼于PVC板上，2mm重疊，壓緊后3.9mm裁條，β-HCG試紙條和PDG試紙條分別裝于下蓋22上，裝上海綿墊40、上蓋21及端蓋30。

10.如權利要求7所述的用于人體尿液中β-HCG、PDG定量檢測的試劑盒的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括以下步驟，

(1)制備膠體金：加熱1L超純水至沸騰，向沸水中加入1ml 10％氯金酸溶液，快速加入1.5ml 10％檸檬酸三鈉溶液，攪拌混勻，保持溶液沸騰，直到液體呈酒紅色即停止加熱，冷卻至室溫后補足失水；

(2)制備β-HCG抗體標記溶液：取一定體積的膠體金溶液，加入0.1mol/L K₂CO₃調節PH，緩慢加入β-HCG抗體，β-HCG抗體的濃度控制為10ug/ml左右，繼續攪拌30分鐘后，加入10％BSA溶液封閉15分鐘，12000～15000r/min離心30分鐘，棄去上清液，沉淀用緩沖液懸浮，4℃保存備用；

(3)制備PDG單抗標記溶液：取一定體積的膠體金溶液，0.1mol/L K₂CO₃調節PH，緩慢加入PDG單抗，PDG單抗的濃度為3.5ug/ml左右，繼續攪拌30分鐘后，加入10％BSA溶液封閉15分鐘，12000～15000r/min離心30分鐘，棄去上清液，沉淀用緩沖液懸浮，4℃保存備用；

(4)制備兔IgG標記溶液：取一定體積的膠體金溶液，0.1mol/L K₂CO₃調節PH，緩慢加入兔IgG，使其終濃度為4ug/ml，繼續攪拌30分鐘后，加入10％BSA溶液封閉15分鐘，12000～15000r/min離心30分鐘，棄去上清液，沉淀用緩沖液懸浮，4℃保存備用；

(5)將玻璃纖維膠分別浸泡在β-HCG抗體標記溶液、兔IgG標記溶液和PDG單抗標記溶液、兔IgG標記溶液中，干燥后作為金標墊備用；

(6)β-HCG抗體包被：在硝酸纖維素膜上分別包被β-HCG抗體形成檢測區，包被羊抗兔IgG形成控制區，干燥后備用；

(7)PDG-BSA半抗原包被：在硝酸纖維素膜上分別包被PDG-BSA半抗原形成檢測區，包被羊抗兔IgG抗體形成控制區，干燥后備用；

(8)樣品墊處理：樣品墊分別用樣品墊處理液浸泡處理，干燥后備用；

(9)將吸水紙、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊依次粘貼于PVC板上，2mm重疊，壓緊后3.9mm裁條，β-HCG和PDG檢測試紙條分別裝于下蓋22上，裝上海綿墊40、上蓋21及端蓋30。