[發(fā)明專利]一種檢測(cè)敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810217658.6
• 申請(qǐng)日: 2018-03-16
• 公開（公告）號(hào): CN108469517A
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張靜;王曉磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北方工業(yè)大學(xué);張靜;王曉磊
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開了一種檢測(cè)敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條及其應(yīng)用。試紙條包括樣品吸收墊、反應(yīng)膜以及吸水墊，反應(yīng)膜位于中間，樣品吸收墊與吸水墊分別搭接于反應(yīng)膜左右兩端；樣品吸收墊上設(shè)有加樣區(qū)和微球區(qū)，微球區(qū)上載有敵百蟲時(shí)間時(shí)間分辨熒光微球；反應(yīng)膜上設(shè)有檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)，T線接上包被敵百蟲抗原(包被原)，C線包被抗兔抗體。本發(fā)明還提供了一種應(yīng)用上述敵百蟲試紙條檢測(cè)蘋果、稻谷、茶葉、柑橘、結(jié)球甘藍(lán)、白菜等樣品中敵百蟲殘留的方法。本發(fā)明所提供的試紙條具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、定量檢測(cè)、快速檢測(cè)、成本低等特點(diǎn)，適合大量樣本的篩查和現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條及其應(yīng)用，屬于時(shí)間分辨熒光免疫分析(TRFIA)技術(shù)領(lǐng)域，用于蘋果、稻谷、茶葉、柑橘、結(jié)球甘藍(lán)、白菜等樣品中敵百蟲的含量檢測(cè)。

背景技術(shù)

敵百蟲學(xué)名0，0-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯，是一種廣泛應(yīng)用于田間農(nóng)作物的有機(jī)磷殺蟲劑，具有低毒、高效、水溶性好等優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)業(yè)上可用于青菜蟲、象鼻蟲、果樹葉蜂等多種蟲害防治，在畜牧業(yè)上可作為一種很好的多效驅(qū)蟲劑，在養(yǎng)殖業(yè)中可用于魚病的防治。但是，敵百蟲容易經(jīng)呼吸道及皮膚進(jìn)入人體，近年來(lái)，其潛在的致癌性和致突變性引起了人們的高度重視。因此，我國(guó)相關(guān)質(zhì)檢部門對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行了限量規(guī)定。GB2763-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定了敵百蟲的最大殘留限量：稻谷、糙米、小麥、花生仁和大豆均為0.1mg/kg，蔬菜中大白菜、結(jié)球甘藍(lán)均為0.1mg/kg，水果中柑橘類、仁果類、核果類、瓜果類等均為0.2mg/kg，茶葉為2mg/kg。

目前，檢測(cè)敵百蟲的方法有氣相色譜法、高效液相色譜法等。儀器檢測(cè)方法的精確度較高，但是儀器昂貴，需要專業(yè)的技術(shù)人員，檢測(cè)步驟復(fù)雜，難以批量檢測(cè)樣品，不適用于基層實(shí)驗(yàn)室批量、快速檢測(cè)樣品。而免疫學(xué)檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏，可同時(shí)檢測(cè)多數(shù)樣品，是理想的快速篩選手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、成本低、檢測(cè)時(shí)間短的敵百蟲時(shí)間分辨熒光試紙條。

本發(fā)明所提供了一種敵百蟲時(shí)間分辨熒光試紙條，該試紙條包括樣品吸收墊、反應(yīng)膜以及吸水墊三部分。反應(yīng)膜位于中間，樣品吸收墊與吸水墊分別搭接于反應(yīng)膜左右兩端。其中，樣品吸收墊上設(shè)有加樣區(qū)和微球區(qū)，微球區(qū)上載有時(shí)間分辨熒光微球；反應(yīng)膜上設(shè)有檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)，T線接上包被敵百蟲抗原，C線包被抗兔抗體。

所述敵百蟲時(shí)間分辨熒光微球，包括檢測(cè)微球和質(zhì)控微球，檢測(cè)微球?yàn)楸砻姘挥袛嘲傧x單克隆抗體的熒光微球，質(zhì)控微球?yàn)楸砻姘挥型每箻?biāo)記蛋白的熒光微球。

所述熒光微球中填充了斕系元素化合物；較優(yōu)的，該斕系元索鰲合物為銪鰲合物；最優(yōu)的，該銪鰲合物可為Eu(TTA)3/TOPO或Eu(TTA)3/Phen。

所述蛋白可以是牛血清Y-球蛋白(BGG)或小牛血清白蛋白(BSA)。

所述時(shí)間分辨熒光微球粒徑范圍為100-1000nm。

所述硝酸纖維素膜上，T線上包被的抗體為敵百蟲抗原，C線上包被的抗兔抗體。

所述敵百蟲時(shí)間分辨熒光免疫定量檢測(cè)試紙條底部設(shè)有塑料底板。

所述T線接上包被敵百蟲抗原是由敵百蟲半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。

所述敵百蟲單克隆抗體是以敵百蟲半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得，是由敵百蟲單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌獲得；所述抗兔抗體是將兔源抗體免疫羊得到。

所述樣品吸收墊為Fusion5膜或其他功能相同的膜；所述吸水墊為吸水墊；所述反應(yīng)膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備上述試紙條的方法，其包括步驟：