[發(fā)明專利]一種檢測敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810217658.6
• 申請日: 2018-03-16
• 公開（公告）號: CN108469517A
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張靜;王曉磊
• 申請（專利權(quán)）人: 北方工業(yè)大學(xué);張靜;王曉磊
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條，包括樣品吸收墊、反應(yīng)膜以及吸水墊，其特征在于所述反應(yīng)膜位于中間，樣品吸收墊與吸水墊分別搭接于反應(yīng)膜左右兩端；所述樣品吸收墊上設(shè)有加樣區(qū)和微球區(qū)，微球區(qū)上載有敵百蟲時(shí)間時(shí)間分辨熒光微球；所述反應(yīng)膜上設(shè)有檢測線(T線)和質(zhì)控線(C線)，T線接上包被敵百蟲抗原(包被原)，C線包被抗兔抗體，所述敵百蟲抗原是敵百蟲半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物，所述敵百蟲半抗原的制備方法如下：

將敵百蟲25.7g溶于100ml二氯甲烷中，加入DMAP 1g，DCC 22.66g，室溫?cái)嚢瑁坏渭雍?5g對羧基苯甲醛的50ml二氯甲烷溶液，滴閉，升溫至40℃，反應(yīng)6h；減壓去溶劑，柱層析純化，得到目標(biāo)物半抗原33g，收率85％。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條，其特征在于所述敵百蟲半抗原的分子結(jié)構(gòu)式為：

3.如權(quán)利要求1所述的檢測敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條，其特征在于所述敵百蟲時(shí)間分辨熒光微球，包括檢測微球和質(zhì)控微球，檢測微球?yàn)楸砻姘挥袛嘲傧x單克隆抗體的熒光微球，質(zhì)控微球?yàn)楸砻姘挥型每箻?biāo)記蛋白的熒光微球。

4.如權(quán)利要求1所述的檢測敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條，敵百蟲單克隆抗體是以敵百蟲半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得，所述免疫原的制備方法如下：

將133mg BSA溶于5ml 0.01M PBS，攪拌溶解；敵百蟲半抗原與BSA比例可在1∶1～60∶1的范圍內(nèi)調(diào)整，本申請選擇在加入39mg敵百蟲半抗原(與BSA摩爾比為50∶1)，加入EDC鹽酸鹽10mg，室溫?cái)嚢?h；移入透析袋中透析48h。

5.如權(quán)利要求1所述的檢測敵百蟲的時(shí)間分辨熒光試紙條，所述包被原的制備方法如下：

將86mg OVA溶于5ml 0.01M PBS，攪拌溶解；敵百蟲半抗原與OVA比例可在1∶1～40∶1的范圍內(nèi)調(diào)整，本申請選擇在加入32mg敵百蟲半抗原(與OVA摩爾比為40∶1)，加入EDC鹽酸鹽10mg，室溫?cái)嚢?h；移入透析袋中透析48h。

6.一種制備權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述試紙條的方法，其包括步驟：

1)制備噴涂有敵百蟲單克隆抗體-時(shí)間分辨熒光標(biāo)記物的樣品吸收墊；

2)制備具有包被有敵百蟲半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測線和包被有抗兔抗體的質(zhì)控線的反應(yīng)膜；

3)將1)和2)制備好的樣品吸收墊、反應(yīng)膜以及吸水墊組裝成試紙條。

7.一種檢測蘋果、稻谷、茶葉、柑橘、結(jié)球甘藍(lán)、白菜等樣品中敵百蟲殘留的方法，其包括步驟：

1)樣本前處理；

2)用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的試紙條進(jìn)行檢測；

3)分析檢測結(jié)果。