[發明專利]一種適合煙草基因編輯素材水溶性糖的測定方法

有效

• 申請號: 201810214643.4
• 申請日: 2018-03-15
• 公開（公告）號: CN108562686B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 李晶;李雪梅;劉欣;向海英;王晉;曾婉俐;孔維松;楊光宇;張承明;許永;黃海濤
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/96
• 分類號: G01N30/96
• 代理公司: 北京市領專知識產權代理有限公司 11590
• 代理人: 楊兵

本發明公開了一種適合煙草基因編輯素材水溶性糖的測定方法，使用以下裝置：樣品萃取瓶，包括：外套管(1)；內套管(2)；導液管(4)；篩板(3)，位于所述內套管(2)的下端開口內，為一個或多個；該方法包括以下步驟：①煙葉萃??；②過濾和轉移；③分析作出色譜圖；④與標準色譜圖的峰面積，即可得到煙草基因編輯素材水溶性糖的含量。本發明的測定方法首次使用在離子色譜分析柱前加一個在線固相萃取凈化柱，具有處理簡單、方便、效果好的優點，測定方法具有定量準確、重復性好、檢出限低等優點，有效實現煙草基因編輯素材中水溶性糖的高通量分析測定。

技術領域

本發明涉及分析化學技術領域，具體是涉及一種適合煙草基因編輯素材水溶性糖的測定方法。

背景技術

糖類化合物是煙草中的重要成分，對煙草的生長發育以及成品煙葉的內在質量均有重要影響。煙草樣品中含有多種糖，但葡萄糖、果糖和蔗糖占煙草中水溶性總糖含量的90％以上；因此煙草中葡萄糖、果糖和蔗糖的測定對了解煙草的生長發育情況及成品煙葉品質的評價均具有重要意義。目前，煙草中水溶性糖的測定文獻報到很多，主要有方法有滴定法、近紅外光譜法、連續流動分析法、毛細管電泳法、氣相色譜法、高效液相色譜法和離子色譜法等。

離子色譜法可以無需衍生直接進行檢測低濃度糖的定量分析，幾乎能分析所有的單糖和大部分的低聚糖，樣品前處理操作簡單，因此該技術在水溶性糖分析中得到了廣泛應用。目前煙草行業標準YC/T 251-2008采用離子色譜法測定煙草中葡萄糖、果糖和蔗糖。但樣品分析時間長(每個樣品的色譜分析時間需40min左右)；而且樣品前處理采用萃取液不經凈化直接進樣，大量樣品分析時萃取液中的干擾成分容易在離子色譜柱上富集，容易污染色譜柱并影響分析結果。隨著煙草行業煙草基因編輯工廠化育種工作的啟動，通過基因編輯將產生數萬個素材。要對這些海量的素材進行快速化學分析評價，現有行業標準很難滿足這些海量素材快速篩選化學分析的需求。

在進行煙草基因編輯素材品質評價過程中，需要尋找一種更簡便、快速的水溶性糖的測定方法，該測定方法可批量、高通量操作，實現快速、高效、準確的測定。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種集在線固相萃取凈化功能的離子色譜分析方法，可有效實現煙草基因編輯素材中水溶性糖的高通量分析測定。

本發明的目的是通過以下技術方案予以實現的。

一種適合煙草基因編輯素材水溶性糖的測定方法，使用以下裝置：

樣品萃取瓶，包括：外套管1，其底部密封且為平底，其口部有一密封圈11；內套管2，其外徑與所述外套管1的內徑相適配，其的長度大于所述外套管1的長度；導液管4，位于所述內套管2內，其下端有一擴張口與所述內套管2的下端內壁密封固定連接，其與所述內套管2上端口固定連接形成受壓面21，其上部伸出所述內套管2外部，并回彎向下；篩板3，位于所述內套管2的下端開口內，為一個或多個；

該方法包括以下步驟：

①將煙葉在-80℃下冷凍，然后在40℃烘干，粉碎并過40目篩；

②稱取步驟1得到的粉末0.1g于所述外套管1中，加入50mL萃取劑，將所述內套管2的一部分插入到所述外套管1中并被所述密封圈11密封，然后在一定溫下超聲萃取20min；

③在所述受壓面21施加向下的力，則所述外套管1中的萃取溶液通過所述篩板3被過濾后進入所述導液管4中，并從導液管4流出進入到樣品收集瓶中，冷卻至室溫得到待分析的樣品濾液；收集樣品濾液1-1.5mL，進行在線凈化離子色譜分析；

④采用峰面積法進行定量，通過樣品中糖類物質的峰面積與標準工作曲線對比，即可確定所述煙草基因編輯素材水溶性糖的含量。

優選地，步驟②所述的萃取試劑為水。

優選地，步驟②所述的溫度為50℃。