[發(fā)明專(zhuān)利]一種適合煙草基因編輯素材水溶性糖的測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810214643.4
• 申請(qǐng)日: 2018-03-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108562686B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李晶;李雪梅;劉欣;向海英;王晉;曾婉俐;孔維松;楊光宇;張承明;許永;黃海濤
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/96
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/96
• 代理公司: 北京市領(lǐng)專(zhuān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11590
• 代理人: 楊兵

1.一種適合煙草基因編輯素材水溶性糖的測(cè)定方法，其特征在于，使用以下裝置：

樣品萃取瓶，包括：外套管（1），其底部密封且為平底，其口部有一密封圈（11）；內(nèi)套管（2），其外徑與所述外套管（1）的內(nèi)徑相適配，其長(zhǎng)度大于所述外套管（1）的長(zhǎng)度；導(dǎo)液管（4），位于所述內(nèi)套管（2）內(nèi)，其下端有一擴(kuò)張口與所述內(nèi)套管（2）的下端內(nèi)壁密封固定連接，其與所述內(nèi)套管（2）上端口固定連接形成受壓面（21），其上部伸出所述內(nèi)套管（2）外部，并回彎向下；篩板（3），位于所述內(nèi)套管（2）的下端開(kāi)口內(nèi)，為一個(gè)或多個(gè)；

該方法包括以下步驟：

①將煙葉在-80℃下冷凍，然后在40℃烘干，粉碎并過(guò)40目篩；

②稱取步驟①得到的粉末0.1 g于所述外套管（1）中，加入50 mL萃取劑，將所述內(nèi)套管（2）的一部分插入到所述外套管（1）中并被所述密封圈（11）密封，然后在一定溫度下超聲萃取20 min；

③在所述受壓面（21）施加向下的力，則所述外套管（1）中的萃取溶液通過(guò)所述篩板（3）被過(guò)濾后進(jìn)入所述導(dǎo)液管（4）中，并從導(dǎo)液管（4）流出進(jìn)入到樣品收集瓶中，冷卻至室溫得到待分析的樣品濾液；收集樣品濾液1-1.5 mL，進(jìn)行在線凈化離子色譜分析，所述的在線凈化離子色譜分析為在離子色譜分析柱前加一個(gè)在線固相萃取凈化柱，所述在線固相萃取凈化柱填料為MCI-GEL反相樹(shù)脂；

④采用峰面積法進(jìn)行定量，通過(guò)樣品中糖類(lèi)物質(zhì)的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)比，即可確定所述煙草基因編輯素材水溶性糖的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟②所述的萃取劑為水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟②所述的溫度為50℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟③所述的篩板的孔徑為0.45μm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟③所述的在線固相萃取凈化柱填料為MCI-GEL反相樹(shù)脂，在線固相萃取凈化柱規(guī)格為4 × 10 mm，填料粒徑為5.0 μm，萃取容量為30 mg。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟③所述的在線凈化離子色譜分析條件為：在線固相萃取凈化柱接在離子色譜分析柱前端，離子色譜條件：CarboPac PA1 4×250 mm，5 μm 碳水化合物分析柱；柱溫：30 ℃；柱流速：1.5 mL / min；進(jìn)樣量：2.0 μL；流動(dòng)相：0.20 mol/L 的氫氧化鈉水溶液；等度洗脫；采用脈沖安培檢測(cè)法檢測(cè)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述脈沖安培檢測(cè)法條件為：以AgCl/Ag為參比電極，Au為工作電極，工作電位如下：0.00-0.40 s，0.1 V； 0.41-0.42 s，- 2.0V；0.43 s，0.6 V；0.44-0.50 s，-0.1 V；積分區(qū)間為0.20-0.40 s。