[發(fā)明專(zhuān)利]關(guān)節(jié)液中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白在人工關(guān)節(jié)感染的檢測(cè)及診斷試劑盒中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810211801.0
• 申請(qǐng)日: 2018-03-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108593923A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文明;李文波;康加祥;洪海峰;白國(guó)昌;汪大明;張翀景;黃子達(dá);李孟慶;方心俞;張超凡;肖江群;胡德慶
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 北京華際知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11676
• 代理人: 陳曉蕾

本申請(qǐng)涉及關(guān)節(jié)液中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)在人工關(guān)節(jié)感染的檢測(cè)及診斷試劑盒中的應(yīng)用。關(guān)節(jié)置換術(shù)是治療終末期關(guān)節(jié)疾病的有效治療方式。但是關(guān)節(jié)假體周?chē)腥臼顷P(guān)節(jié)置換術(shù)后嚴(yán)重的并發(fā)癥。關(guān)節(jié)液NGAL診斷人工關(guān)節(jié)感染具有較高的敏感性和特異性。用熒光顆粒作為標(biāo)記物，通過(guò)免疫層析方法制備關(guān)節(jié)液NGAL的診斷試劑盒(試紙條)。應(yīng)用免疫熒光定量分析儀，可以對(duì)關(guān)節(jié)液標(biāo)本進(jìn)行定量檢測(cè)和即時(shí)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)診斷人工關(guān)節(jié)感染。本申請(qǐng)中的關(guān)節(jié)液NGAL檢測(cè)試劑和診斷試劑盒使用簡(jiǎn)單，反應(yīng)靈敏，診斷準(zhǔn)確性高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，具體涉及關(guān)節(jié)液中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)在人工關(guān)節(jié)感染的檢測(cè)及診斷試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

人工關(guān)節(jié)置換術(shù)是治療嚴(yán)重關(guān)節(jié)疾病的有效方法，但是人工關(guān)節(jié)感染(Prosthetic Joint Infection，PJI)是關(guān)節(jié)置換術(shù)后嚴(yán)重并發(fā)癥之一，其發(fā)生率在初次關(guān)節(jié)置換手術(shù)約為1％～2％，翻修手術(shù)可達(dá)3％～10％。PJI的臨床表現(xiàn)復(fù)雜，其診斷、治療仍存在很多困難。根據(jù)美國(guó)骨科醫(yī)師協(xié)會(huì)、感染病學(xué)會(huì)和肌肉骨骼感染學(xué)會(huì)提出的診斷指南，大部分PJI可以獲得明確的診斷和及時(shí)的治療。但是，也有一些臨床表現(xiàn)不典型的病人，診斷十分困難。

現(xiàn)有的診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查綜合判斷，后者包括ESR、CRP、細(xì)菌培養(yǎng)、關(guān)節(jié)液WBC計(jì)數(shù)與分類(lèi)等。這些指標(biāo)在診斷PJI的特異性、敏感性仍存在一些不足：1、細(xì)菌培養(yǎng)是診斷PJI的“金”標(biāo)準(zhǔn)之一，但細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率為60％～70％左右，敏感性不夠高。2、關(guān)節(jié)液白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類(lèi)是診斷PJI的有效方法，但全身炎癥性關(guān)節(jié)炎病人關(guān)節(jié)置換后，該指標(biāo)也會(huì)升高，特異性不強(qiáng)。3、現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室診斷方法，無(wú)法做到即時(shí)診斷(Point of CareTesting，POCT，或稱(chēng)床邊診斷)。因此，尋找一種快速簡(jiǎn)便、靈敏度高和特異性強(qiáng)的檢測(cè)方法，對(duì)PJI的診斷有重要意義。

近年來(lái)，關(guān)節(jié)液中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)生物標(biāo)志物在PJI診斷中受到關(guān)注。NGAL屬于抗菌肽家族與脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(lipocalin)家族，是中性粒細(xì)胞顆粒中的主要蛋白質(zhì)，具有廣譜的抗菌活性。現(xiàn)有關(guān)節(jié)液生物標(biāo)志物檢測(cè)多采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒，臨床上需收集到一定數(shù)量的標(biāo)本才能檢測(cè)，價(jià)格高，無(wú)法滿(mǎn)足臨床個(gè)體化和POCT的需要。膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)是一種半定量技術(shù)，使用簡(jiǎn)便，但無(wú)法定量檢測(cè)。免疫熒光層析技術(shù)是一種以獨(dú)特?zé)晒馓匦缘蔫|系元素及其螯合劑作為示蹤物的非放射性免疫標(biāo)記技術(shù)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室和POCT診斷。因此，本項(xiàng)目將應(yīng)用熒光顆粒作為標(biāo)記物，通過(guò)免疫層析方法制備N(xiāo)GAL標(biāo)志物的診斷試劑盒(條)，應(yīng)用免疫熒光定量分析儀，可以對(duì)關(guān)節(jié)液標(biāo)本定量檢測(cè)和即時(shí)檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供關(guān)節(jié)液中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)在人工關(guān)節(jié)感染的檢測(cè)及診斷試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種定量檢測(cè)關(guān)節(jié)液中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)的免疫熒光試紙條，所述試紙條包括反應(yīng)膜1、樣品墊2、吸收墊3和底板4；所述反應(yīng)膜1位于所述底板4上，所述反應(yīng)膜1上固定有檢測(cè)帶5和質(zhì)控帶6，所述樣品墊2與所述反應(yīng)膜1的一側(cè)部分重疊并位于所述反應(yīng)膜1和所述底板4上，所述吸收墊3與所述反應(yīng)膜1的另一側(cè)部分重疊并位于所述反應(yīng)膜1和所述底板4上，所述樣品墊2上包括加樣點(diǎn)7；其中所述檢測(cè)帶包被有熒光顆粒標(biāo)記的抗NGAL抗體，所述質(zhì)控帶包被有羊抗鼠IgG抗體。

在一個(gè)方面中，所述底板4的材料選自ABS、PS、PE、PVC或PC中的任意一種；所述樣品墊2或吸收墊3的材料選自纖維素、玻璃纖維或紡織聚合物中的任意一種；所述反應(yīng)膜1的材料選自硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜、尼龍膜或聚四氟乙烯膜中的任意一種。