[發明專利]關節液中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白在人工關節感染的檢測及診斷試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 201810211801.0
• 申請日: 2018-03-15
• 公開（公告）號: CN108593923A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 張文明;李文波;康加祥;洪海峰;白國昌;汪大明;張翀景;黃子達;李孟慶;方心俞;張超凡;肖江群;胡德慶
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 北京華際知識產權代理有限公司 11676
• 代理人: 陳曉蕾

1.一種定量檢測關節液中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)的免疫熒光試紙條，所述試紙條包括反應膜(1)、樣品墊(2)、吸收墊(3)和底板(4)；所述反應膜(1)位于所述底板(4)上，所述反應膜(1)上固定有檢測帶(5)和質控帶(6)，所述樣品墊(2)與所述反應膜(1)的一側部分重疊并位于所述反應膜(1)和所述底板(4)上，所述吸收墊(3)與所述反應膜(1)的另一側部分重疊并位于所述反應膜(1)和所述底板(4)上，所述樣品墊(2)上包括加樣點(7)；其中所述檢測帶包被有熒光顆粒標記的抗NGAL抗體，所述質控帶包被有羊抗鼠IgG抗體。

2.如權利要求1所述的免疫熒光試紙條，所述底板(4)的材料選自ABS、PS、PE、PVC或PC中的任意一種；所述樣品墊(2)或吸收墊(3)的材料選自纖維素、玻璃纖維或紡織聚合物中的任意一種；所述反應膜(1)的材料選自硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜、尼龍膜或聚四氟乙烯膜中的任意一種。

3.如權利要求1所述的免疫熒光試紙條，所述抗NGAL抗體的終濃度為0.5～2.0mg/mL(優選1.0mg/mL)，包被量為0.5～2μL/cm(優選1μL/cm)；所述羊抗鼠IgG抗體的終濃度為0.5～2.0mg/mL(優選1.0mg/mL)，包被量為0.5～2μL/cm(優選1μL/cm)。

4.如權利要求1所述的免疫熒光試紙條，所述檢測帶(5)與質控帶(6)之間的距離為約1.0～10mm(優選5.0mm)，所述檢測帶(5)與質控帶(6)的寬度為約0.5～2.0mm(優選0.8～1.0mm)；所述反應膜(1)和樣品墊(2)的連接處重疊1～2mm；所述反應膜(1)和吸收墊(3)的連接處重疊1～2mm。

5.一種如權利要求1所述的免疫熒光試紙條的制備方法，包括以下步驟：

1)抗體的制備：采用基因工程方法制備抗NGAL抗體、羊抗鼠IgG抗體；采用熒光顆粒標記抗NGAL抗體；用含BSA的PBS稀釋熒光顆粒標記的抗NGAL抗體至合適的濃度；再用同樣的溶液稀釋羊抗鼠IgG抗體至合適的濃度；

2)包被反應膜(1)的制備：采用噴膜機分別在反應膜(1)上噴印檢測帶(5)與質控帶(6)，檢測帶(5)與質控帶(6)之間保留合適的距離，檢測帶(5)與質控帶(6)保留合適的寬度；抗NGAL抗體或羊抗鼠IgG抗體的包被量適合反應膜(1)；噴印完成后，干燥備用；

3)樣品墊(2)的制備：用含BSA的PBS液浸泡樣品墊(2)，處理后，干燥備用；

4)免疫熒光試紙條的制備：先將反應膜(1)粘附在底板(4)的中間位置上，在反應膜(1)的一側粘附吸收墊(3)，反應膜(1)和吸收墊(3)的連接處重疊一部分；在反應膜(1)的另一側粘附樣品墊(2)，反應膜(1)和樣品墊(2)的連接處重疊一部分；再將粘貼好反應膜(1)、樣品墊(2)和吸收墊(3)的底板(4)裁切成合適寬度的細條。

6.如權利要求5所述的制備方法，所述步驟1)中用含1～10％(優選5％)BSA的1～20mM(優選10mM)PBS稀釋熒光顆粒標記的抗NGAL抗體，使其終濃度為0.5～2.0mg/mL(優選1.0mg/mL)；用同樣的溶液稀釋羊抗鼠IgG抗體，使其終濃度為0.5～2.0mg/mL(優選1.0mg/mL)。

7.如權利要求5所述的制備方法，所述步驟2)中檢測帶(5)與質控帶(6)之間的距離約1.0～10mm(優選5.0mm)，檢測帶(5)與質控帶(6)的寬度約0.5～2.0mm(優選0.8～1.0mm)；抗NGAL抗體或羊抗鼠IgG抗體的包被量分別為0.5～2μL/cm(優選1μL/cm)。

8.如權利要求5所述的制備方法，所述步驟3)中用含1～10％(優選5％)BSA的1～20mM(優選10mM)PBS液浸泡樣品墊(2)；和/或，反應膜(1)和樣品墊(2)的連接處重疊1～2mm；反應膜(1)和吸收墊(3)的連接處重疊1～2mm。

9.關節液NGAL或抗NGAL抗體在制備用于診斷人工關節感染的試劑或試劑盒中的用途。